4.将PCR反应管置于热循环器中。5.启动以下RT反应程序：37℃,1 h; 95℃, 5 min, 4℃保存。6.取下PCR管。用180 μL无核酸酶水（稀释10倍）稀释产物。产物可以存储在-20°C。六、 qPCR检测 在qPCR管中配制如下混合液 2.按下列条件进行qPCR反应 七、实验结果 7.1抗体在细胞样本中表达验证 （质控1）例如：结果
RIP的实验原理和CHIP类似，是利用某一蛋白的抗体，将目标蛋白的抗体把相应的RNA-蛋白复合物沉淀下来，经过分离纯化就可以捕获和目标蛋白互作的RNA分子，再对捕获的RNA进行定量RT-PCR或高通量测序（RIP-Seq）方法来进行鉴定。RIP实验当前已经衍生出很多方法，可以主要分为两大类，自然沉淀法（Native methods）和交联RNA...
RIP实验的流程可以概括为以下几个步骤：首先，收集细胞并制备细胞裂解液；其次，将细胞裂解液与目的RNA结合蛋白和抗体混合，进行免疫沉淀；然后，洗涤并纯化免疫沉淀后的RNA；最后，将RNA逆转录为cDNA，并通过qPCR、微阵列或测序进行分析。在具体操作中，制备细胞裂解液的方法有两种：自然沉淀法和交联法。自然沉淀法包括...
4、q-pcr数据处理 ΔCt [normalized IP] = (Ct [IP] - (Ct [Input] -Log2 (Input Dilution Factor)))% Input = 2 ^(-ΔCt [normalized IP])*100% 我们的input通常为总量的1/10，即稀释了10倍，Log2 (Input Dilution Factor)≈3.3 计算示例：ΔCt=17.55-（14.05-3.3）=6.8 %input=2...
实验步骤包括：使用冷PBS清洗培养的细胞或组织，刮下细胞并收集沉淀。然后用RIP裂解液重悬细胞，进行各种处理并利用磁珠等工具捕获RNA结合蛋白。在此过程中，保持实验环境的无菌无污染至关重要。特别是在细胞或组织的裂解、磁珠的处理和RNA的分离阶段，无菌操作可以减少实验误差。◇ 数据分析与检测策略 在完成RIP实验后，...
4、结合的 RNA 序列通过 microarray(RIP-Chip),定量 RT-PCR 或高通量测序(RIP-Seq) 方法来鉴定。 RIP实验基本步骤 一、细胞裂解液获取 A.单层细胞或者贴壁细胞处理 1、冷 PBS 清洗培养皿或培养瓶中的细胞两次; 2、加入冷 PBS 后用细胞刮将细胞刮下来,收集至 enpendoff 管; ...
RIP实验步骤(RNA Immunoprecipitation)RIP 技术用于定位体内的RNA-蛋白质相互作用。将所关注的RNA结合蛋白(RBP)与其结合的RNA一起进行免疫沉淀，鉴定结合转录RNA（mRNA、非编码 RNA或病毒RNA）。可以通过实时PCR、微阵列或测序检测。RIP实验步骤：一、裂解样本 1. 细胞生长约90%覆盖度，细胞计数，收件约1× 10 ^7...
RIP技术实验流程流程 RNA免疫沉淀RIP实验流程 分离的 RNA 可以通过多种分子方法进行分析，包括终点 RT-PCR 和定量 RT-PCR（如果 RBP 的结合目标已知）、微阵列或深度测序方法。RIP技术应用背景 RNA结合蛋白（RNA binding protein，RBP）是一类功能强大而广泛的调节因子，约占细胞编码的所有蛋白的5%~10%。目前除了少数...