基因工程化的AAV能转导外源基因，借助特定启动子、光遗传学/化学遗传学元件、钙指示剂、神经递质探针或Cre/lox P，Flp／FRT重组酶技术，可选择性地标记特定的神经元。越来越多的神经环路研究使用AAV作为神经示踪工具。AAV血清型种类多，不同的血清型对神经元有不同的感染特性。神经科学研究中常用的 AAV 血清型有 ...
常见的 AAV 病毒载体都是顺向标记,极少能进行逆行传递,这大大限制了 AAV 载体在神经环路示踪中的应用。直到 2016 年,研究人员在 AAV2 的基础上,通过定向进化的方式改造出一种具有逆向示踪功能的 AAV2 突变体——AAV2-retro,该载体能够在小鼠大脑中进行有效的神经环路逆向标记,且其逆行示踪能力和效率与传统的逆行...
AAV9-Retro不仅具有与AAV2-Retro相当的逆行转导效率，还保留了AAV9血清型跨血脑屏障的特性。成年小鼠尾静脉注射AAV9-Retro-EGFP后，在皮层、纹状体、苍白、海马体、丘脑、下丘脑等重要的脑区均有荧光信号，且其转导效率与AAV9血清型相当。因此，AAV9-Retro用于外周递送基因进行上行标记具有更大的潜力。AAV9-Retro...
AAV9-Retro既保留了AAV9跨血脑屏障的特性同时还具有与AAV2-Retro相当的逆行感染神经元的能力,为中枢神经系统(CNS)的系统性给药提供了更多新的途径,同时也为神经环路研究以及神经退行性疾病的临床前和临床治疗提供了新的工具。 相较于其他血清型AAV,通过定向进化改造而来的AAV2-Retro具有更高的逆行转导效率,在分析...
AAV9-Retro不仅具有与AAV2-Retro相当的逆行转导效率,还保留了AAV9血清型跨血脑屏障的特性。成年小鼠尾静脉注射AAV9-Retro-EGFP后,在皮层、纹状体、苍白、海马体、丘脑、下丘脑等重要的脑区均有荧光信号,且其转导效率与AAV9血清型相当。因此,AAV9-Retro用于外周递送基因进行上行标记具有更大的潜力。
可逆向示踪的血清型 — AAV2-retro 利用神经示踪工具实现对神经环路的精确标记,主要涉及两大基本问题即方向性(顺向、逆向)和是否跨突触。顺向(Anterograde)是由注射部位的神经元胞体经轴突下行至末梢,逆向(Retrograde)则是由轴突末梢传到细胞体;顺向跨突触是从胞体传到轴突末梢后跨过突触传递至下一级神经元,逆向跨...
在小鼠VTA脑区注射rAAV9-Retro-CaMKIIa-EGFP病毒,21天后发现VTA上游脑区具有大量荧光信号。进一步与AAV2-Retro进行比较,结果发现这两种血清型可以感染相同的脑区(VTA、CPU)以及其上游脑区,且两者逆行感染效率相当(图1、图2)。 图1 rAAV9-Retro和rAAV2-Retro注射VTA(上)...