Real Time PCR,即实时荧光定量PCR,也被称为定量PCR或qPCR,是实时监测PCR扩增产物并进行解析的方法。 由于定量PCR具有操作简单、快速方便、灵敏度高、重复性好、污染率低等优点,被广泛应用于医学检测、药物疗效考核、基因表达研究、转基因研究、基因检测、病原体检测、动植物检测、食品检测等各种领域。 所以,无论您从...
Real—time qPCR技术的定量原理: 一、扩增曲线 在Real—time qPCR中,对整个PCR反应扩增过程进行了实时的检测并记录其荧光信号,随着反应的进行,监测到的荧光信号可以绘制成一条曲线,即为扩增曲线。 荧光扩增曲线一般分为基线期、指数增长期和平台期。 在Real—time qPCR扩增早期,扩增的荧光信号被荧光背景信号所掩盖,...
(2)实时荧光定量反转录PCR(Real-time RT-PCR,RT-qPCR) 实时荧光定量反转录PCR(Real-time RT-PCR,RT-qPCR)是qPCR和RT-PCR的组合,所以RT-qPCR(也有人写成qRT-PCR)是结合了荧光定量技术的反转录PCR,即以mRNA或总RNA为模板,先反转录得到cDNA,再以cDNA为模板,通过荧光定量PCR进行定量检测分析(RT-PCR只可以定性...
Real-time RT-PCR是qPCR和RT-PCR的组合，其中的“RT”是Reverse transcription（逆转录）的意思，所以RT-qPCR就是结合了荧光定量技术的逆转录PCR，即以mRNA或总RNA为模板，先反转录得到cDNA，再以cDNA为模板，通过荧光定量PCR进行定量检测分析。因为RT-PCR只可以定性，但不能进行定量分析。与RT-PCR一样，RT-qPCR...
2 Real-time qPCR 的数学原理：也就是说为什么 Ct 值跟初始模板的量成正比？首先来看一个 real-time qPCR 中的重要参数（具体的后面会讲到 ） Ct 值（ Ct value）， 阈值（ threshold），和基线（ baseline）。 一般来讲，第 3-15 个循环的荧光值就是基线，是由于测量的偶然误差引起的。阈值一般是基线的...
Real Time PCR(qPCR),即实时荧光定量核酸扩增检测系统,是一种利用荧光染剂检测每次PCR循环后产物总量的方法技术,是常规PCR的衍生反应。主要是通过荧光信号的变化实时监测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化,通过ct值和标准曲线的关系对起始模板进行定量分析。因其具有灵敏、特异、精确以及使用简便等优点,现已发展...
Real-timePCR实验原理 实时荧光定量PCR技术概述 1 实时荧光定量PCR技术是一种在PCR反应过程中，通过荧光信号的实时监测，对DNA进行定量分析的方法。2 该技术结合了PCR的高特异性和荧光探针的高灵敏度，实现了对DNA的快速、准确和动态的定量检测。3 实时荧光定量PCR技术在生物学、医学、农业和环境科学等领域具有广泛的...
Real-time qPCR中最常用的荧光探针为TaqMan探针,其基本原理是依据目的基因设计合成一个能够与之特异性杂交的探针,该探针的5'端标记荧光基团,3'端标记淬灭基团。TaqMan探针技术解决了荧光染料与非特异性扩增结合的问题,反应结束后无需通过熔解曲线检测,缩短了实验时间。