下面是RAW264.7细胞的培养条件:- 培养温度:37°C- CO2浓度:5%- 恒温箱:生物安全柜或洁净室内3. 培养细胞在开始培养之前,请确保对实验器材进行消毒,以避免外部污染的影响。3.1 细胞的解冻1)使用1%的DMEM溶液将冰冻细胞冻存管均匀地加温到37°C;2)将解冻细胞缓慢地加入到10ml的预先准备的DMEM/FBS培养基...
2.分化的细胞贴壁牢固,传代的时候千万不要强制性吹下这些细胞,只接种容易吹下的那些未分化细胞;3.吹打的力度一定要轻,切勿暴力吹打;细胞的贴壁性和培养器皿的材料也有关,有时RAW264.7细胞会出现太容易吹下的情况,连分化细胞都贴壁较松,此时更适宜用巴氏管吹打;4.培养时,无法保证100% 不分化,通过传代...
传代时,把握好时机,当细胞生长至 80% - 90% 融合度时,利用温和的胰蛋白酶消化,避免消化过度损伤细胞,轻柔吹打使细胞分散均匀后按比例传代,一般 1:3 - 1:5 传代比例较为合适,既能保证细胞持续增殖,又能维持良好细胞活性。再者,日常观察与维护不可少。每天通过显微镜观察细胞形态,正常的 RAW 细胞呈圆形...
1. 传代时机 当细胞密度达到80%-90%时,即可进行传代操作。2. 传代步骤 清洗:用不含钙、镁离子的PBS缓冲液清洗细胞2次,以去除残留的培养基和死细胞。刮落细胞:由于RAW264.7细胞传代时不需要胰酶消化(胰酶会刺激细胞严重分化),因此可用无菌细胞刮刀轻轻刮拭培养表面,将细胞刮落。注意刮刀的使用力度和次数,...
RAW264.7细胞是一种鼠源的巨噬细胞系,RAW264.7属贴壁细胞,最好的形态呈现为小而圆、透亮,但其也极易出现伪足的细胞形态,这也是大家细胞总是养不好、消化传代困难的根源,同时也是实验数据不理想的罪魁祸首。除此之外,细胞生长缓慢、贴壁困难,也是大家在养细胞过程中出现的最...
首先我们讨论的第一大问题是胰酶消化对RAW 264.7细胞的刺激分化。如图2所示:被胰酶消化过的RAW 264.7细胞表现出明显的分化现象呈多角形,有较长触角。图2 分化的RAW 264.7(小鼠单核巨噬细胞白血病细胞)如何避免细胞传代因胰酶而受刺激分化,刮取是比较合适的方法。把细胞培养液倒掉,加入37℃遇温的PBS,然后...
RAW 264.7细胞源自Abelson鼠科白血病病毒诱导的肿瘤;sIg-、Ia-抗原、Thy-1.2表面抗原阴性。RAW 264.7细胞不分泌可检测到的病毒颗粒,XC斑点形成试验阴性。RAW 264.7细胞可以胞饮中性红并吞噬乳胶颗粒与酵母聚糖,并且可以抗体依赖性地分解绵羊红血球与肿瘤靶细胞。LPS或PPD处理2天可诱导RAW 264.7细胞分解红血球,但对肿瘤靶...
一、细胞培养前的准备 培养基的选择RAW 细胞通常对培养基的成分有特定要求。一般推荐使用含有高糖的 DMEM 培养基,并添加适量的胎牛血清(FBS),FBS 的浓度一般在 10% - 15% 为宜。血清能为细胞提供必要的营养物质和生长因子,促进细胞的增殖和存活。同时,要确保培养基中含有适量的抗生素,如青霉素和链霉素,以...
RAW264.7属贴壁细胞,最好的形态呈现为小而圆、透亮,但其也极易出现伪足的细胞形态,这也是大家细胞总是养不好、消化传代困难的根源,同时也是实验数据不理想的罪魁祸首。除此之外,细胞生长缓慢、贴壁困难,也是…
一、细胞起源与核心特性 RAW264.7细胞于1975年从BALB/c小鼠的腹腔巨噬细胞中分离,经Abelson鼠白血病病毒诱导永生化,具备以下特性:形态特征:贴壁生长,呈圆形或梭形,激活后可伸出伪足;功能特性:保留巨噬细胞吞噬功能(如吞噬荧光微球效率达70%),并响应脂多糖(LPS)分泌TNF-α、IL-6等炎症因子;遗传背景:...