更值得注意的是,SLC35A1离开内质网并定位到高尔基体需要仅由20aa组成的C端细胞质尾部,而SLC35A1的C端胞质尾部缺失(∆C Tail)突变体没有显著降低SIA的表达,但它显著降低了rAAV的转导以及载体进入细胞核,这表明C尾在这些过程中起着...
腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)是一类单链线性DNA缺陷型病毒。通过对AAV进行工程化改造,科学家已经制造出了适合用于细胞转染的重组AAV载体(rAAV,即recombinant AAV)。它们具有免疫原性低、靶向性强、宿主范围广和可长期稳定地表达外源基因等特点,因此被科研人员广泛应用于基因功能研究的体内基因操作实验。近年来...
通过使用Cre转基因小鼠筛选平台和M-CREATE(多重Cre依赖性选择)方法,研究人员对AAV-PHP.eB衣壳进行了序列工程化,开发新型腺相关病毒(AAV)衣壳变体AAV.CAP-B10和AAV.CAP-B22,
在此基础上,检测出rAAV病毒的CT值,便可以得到病毒的滴度。 ② 病毒基因组大小及纯度检测 rAAV基因组鉴定较为简单,只需要提取rAAV的基因组,再进行琼脂凝胶电泳即可。由于我们已经知道目的序列和两端ITR的整个rAAV基因组大小,所以从电泳结果便可以判别出rAAV是否包含我们目的的片段,此外还能得知是否存在不正确的核酸序...
在DNA递送载体中,重组腺相关病毒(rAAV)是商业化上市基因药物和临床试验中最有效和最安全的载体之一。然而,目前rAAV的制备能力明显落后于临床和商业用途的剂量需求,主要反映在宿主细胞的生产力低,产生rAAV的过程难以扩展,以及在生产过程中的高水平杂质等问题。这些问题直接影响了市场上基因治疗药物的价格,限制了大多数...
腺相关病毒(adeno-associated virus, AAV)是微小病毒科(parvoviridae)家族的成员之一,是一类无法自主复制、无被膜的二十面体微小病毒,其直径约 20-26nm,含有 4.7kb 左右的线状单链 DNA 作为基因组。研究中采用的重组腺相关病毒载体(recombination adeno-associated virus, rAAV)是在非致病的野生型 AAV 基础上改造...
AAV是自然界中存在的、未经过人工改造的病毒，能够依赖辅助病毒进行复制，但其本身不常引发疾病。rAAV是...
1.2、rAAV病毒样粒子的装配 在细胞内,rAAV病毒样粒子的装配只需Cap基因表达即可完成,且装配在细胞核内进行。Cap基因只编码VP1、VP2和VP3三种蛋白,但是病毒样粒子的形成究竟是需要三种蛋白、两种蛋白还是一种蛋白,一直存在争论。 VP1和VP2主要定位于细胞核内,而单体的VP3在核内和细胞质内均有分布,表明VP1、VP2...
滴度检测指检测rAAV的基因拷贝数,计算每ml病毒液的病毒颗粒中含有的基因组拷贝总数。具有多种检测的手段,包括DNA斑点杂交(dot-blotting)、ELISA、qPCR和ddPCR等,通常使用绝对定量的方法。首先通过建立标准曲线,得知标准品DNA含量与CT值的线性关系。在此基础上,检测出rAAV病毒的CT值,便可以得到病毒的滴度。
肖卫东课题组与Richard Jude Samulski, Roland Herzog教授在Molecular Therapy(29(9):2637-2639,2021)提出新的见解,他们认为rAAV包装中的一类病毒杂质-SBG(snapback genome)可能是肿瘤形成的风险因素。这些分子在载体中,有可能就是一颗老鼠屎,坏了一锅汤。