- qRT-PCR仪器：包括逆转录仪和实时荧光定量PCR仪。- 实验耗材：包括离心管、PCR管、PCR板等。2. RNA逆转录 a. 将RNA样本与逆转录试剂混合，并在逆转录仪中进行反应。通常情况下，逆转录反应体系包括RNA样本、逆转录酶、随机引物、dNTPs等。b. 根据逆转录试剂盒的说明书，设置逆转录反应的温度和时间。一般来说...
逆转录(RT):使用逆转录酶将mRNA逆转录成cDNA。这一步骤是PCR反应的模板准备。 引物稀释和qPCR体系配置:设计特异性的引物,用于目标基因的扩增。配置qPCR反应体系,包括cDNA模板、引物、dNTPs、DNA聚合酶、缓冲液等。 qPCR循环:在荧光定量PCR仪中进行PCR扩增,包括初始变性、循环扩增(变性、退火、延伸)等步骤。扩增后,...
用核酸清洁剂擦拭移液枪和台面,确保所有试剂、耗材处理彻底,保证无酶环境。 一、细胞中RNA提取 1.1裂解:添加Trizol破坏细胞释放RNA 每5-10x106个细胞1mL trizol,置于冰盒上。 1.2萃取:添加氯仿使混合物分组 …
提RNA+逆转录+qRT-PCR 步骤 【一、提 RNA】 一、实验准备: 1、试剂:75%乙醇、Trizol、1.5mL 进口 EP 管、氯仿、异丙醇、进口枪头(RNA 专用)、 2、配 75%乙醇(DEPC 水+无水乙醇),放-20℃冰箱预冷; 3、预冷离心机(1.5mL EP 管用的); 4、清洁桌面,酒精喷过之后擦干,新手套、两层口罩; 二、操作步...
01、进口10μL枪头(qRT-PCR专用)、冰盒一个、200μL进口EP管; 02、冰上融化1、2、4、2号试剂(提前半小时); 03、 二、操作步骤: 试剂盒:1. 2μL 2. 0.5μL(最后加入) 3. 0.5μL 4. 0.5μL RNA 1000ng DEPC水 ---10μL体系 01、200μL进口管子:EP管加相应DEPC水==>加1号试剂(2μL)=...
那qrtpcr的步骤是咋样的呢?首先得准备好各种试剂和样本,这就像是要开始一场冒险,得先把装备都准备齐全咯。然后把样本和试剂混合在一起,放进那个神奇的仪器里,让它们在里面发生奇妙的反应。这就好像是给这些小家伙们搭建了一个舞台,让它们尽情地表演。 在这个过程中,温度可是个关键因素呢!一会儿升高一会儿降低,就...
01、进口10μL枪头(qRT-PCR专用)、冰盒一个、200μL进口EP管; 02、冰上融化1、2、4、2号试剂(提前半小时); 03、 二、操作步骤: 试剂盒:1。 2μL 2。 0.5μL(最后加入) 3。 0。5μL 4.0.5μL RNA 1000ng DEPC水 ---——-———-——--——10μL体系 ...
microRNA 的stem-loop-Qrt-PCR 引物设计 microRNAs 的平均长度23nt 左右,所以miRNA 引物设计与常规 引物设计存在很大差别,以下讲解一下整个miRNA 引物设计的过 程加上实验流程,以帮助大家对各方面的学习。 首先,引物设计之前先介绍miRNA 反转录 cDNA 的过程。 我们拿经典颈环序列 GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCA...
此SOP将涵盖总RNA提取和两步法逆转录定量PCR(qRT PCR)的操作过程以及数据分析。 2. 注意事项 ü 所有步骤均应在超净工作台上进行,超净台紫外照射至少15min。 ü 所有试剂应为此实验专用。 ü 使用75%乙醇或其他去污剂擦拭工作台,避免表面污染。 ü 进...