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QRT-PCR引物设计PROTOCOL QRT-PCR引物设计概述：在QRT-PCR过程中，由于涉及到模板定量，所以要求引物特异性强，并且不能扩增出基因组DNA（如果用DNA酶处理干净另当别论），所以要求跨外显子设计（可以不用考虑基因组DNA污染），或跨内含子设计（检验DNA酶是否处理干净，即无基因组DNA污染）。下面是自己在设计过程的...
qRT-PCR protocol Total RNA was extracted from maize leaves or protoplasts and N. benthamiana leaves using TRIzol reagent (Invitrogen) and treated with 5 U of RNase-free DNAase I (TaKaRa) at 37oC for 30 min. The DNase I-treated total RNAs were recovered by ethanol precipitation. About 0.5...
[1] Waters DL, Shapter FM. The polymerase chain reaction (PCR): general methods. Methods Mol Biol. 2014;1099:65-75. doi: 10.1007/978-1-62703-715-0_7. PMID: 24243196. [2] Lorenz TC. Polymerase chain reaction: basic protocol plus troubleshooting and optimization strategies. J Vis Exp. ...
PCR反应的扩增效率严重的影响到PCR的结果,同样在qRT-PCR中,扩增效率对定量的结果尤为重要,除去反应液(reaction buffer)中其他物质及机器和protocol带来的影响,引物的质量对于qRT-PCR的扩增效率影响也非常大,为了保证结果的准确性,无论是相对荧光定量还是绝对荧光定量均需要对引物的扩增效率进行检测,而公认的有效的qRT-...
3)本试剂盒不含ROX染料,使用ABI PRISM® 7000/7700/7900HT,7300/7500/7500 Fast Real-Time PCR System 等需额外添加ROX染料作为校正荧光的仪器,请用户自行准备所需的ROX染料。 2)建议使用标准三步法进行检测,请在定量PCR仪(以Bio-Rad CFX96为例)上设定如下程序: ...
QRT-PCRprotocol Generalnotes: ConsistencyiscrucialtotheaccuracyofQRT-PCR,sotheextrastepsin thisprotocolarenecessary.Ingeneral,beextracarefultotreateverysample thesame.Alwaysusefiltertips,anddonoaspiratewhenpipetting(onlygo downtothefirststop).Avoidbubbleformation,whichcanacceleratethe degradationofthecDNA.TheSYBR...
QRT-PCR protocol General notes: Consistency is crucial to the accuracy of QRT-PCR, so the extra steps in this protocol are necessary. In general, be extra c General notes: Consistency is crucial to the accuracy of QRT-PCR, so the extra steps in this protocol are necessary. In general, ...
QRT-PCR引物设计protocolQRT-PCR引物设计 概述: 在QRT-PCR过程中,由于涉及到模板定量,所以要求引物特异性强,并且不能扩增出基因组DNA(如果用DNA酶处理干净另当别论),所以要求跨外显子设计(可以不用考虑基因组DNA污染),或跨内含子设计(检验DNA酶是否处理干净,即无基因组DNA污染)。下面是自己在设计过程的一些心得...
干货分享｜采用 qRT-PCR 检测细胞炎性因子 一、原理 qPCR 技术通过引物特异性扩增目标 DNA 序列，并通过荧光探针或 SYBR Green I 荧光染料法检测 PCR 产物的数量，来定量分析样品中目标序列的数量。qPCR 技术具有快速、准确、高灵敏度和高特异性等优点。二、用途 广泛应用于基因表达分析、突变检测、病原体检测等...