实时荧光定量PCR | qRT-PCR实验RNA提取、RNA浓度测定和反转录合成cDNA的过程解析, 视频播放量 8.1万播放、弹幕量 261、点赞数 1430、投硬币枚数 388、收藏人数 4083、转发人数 762, 视频作者 睦科生物, 作者简介 专业从事动物建模、病理学、分子生物学、材料定制化等实验外
此实验步骤主要是qpcr和上机测试的过程,可以根据说明说按比例混合配制qpcr反应液。 点板:按需稀释cDNA(一般为10倍),将配制好的引物和cDNA按照相应比例加入八联管,等待上机测试。 上机测试:接下来是LightCyc…
根据试剂盒配比加入相应的试剂得到RT反应液,将反应液放入T100梯度PCR仪。 以上就是RNA提取和cDNA合成的过程。
1. RNA提取首先，弃去细胞培养液，使用PBS清洗后，每孔加入RNAiso Plus。随后，提取步骤涉及氯仿处理，将RNA与上清液分离。将上层水相转移到新的去酶EP管，加入异丙醇，静置后离心，再用无水乙醇进一步纯化RNA，形成白色沉淀。经过洗涤、干燥和加DEPC水溶解后，部分RNA用于cDNA合成。2. RNA浓度测定使用Nan...
qRT-PCR实验主要分为两部分，即qPCR（实时荧光定量PCR）反应和上机测试。首先，需要按照说明书中给出的比例精确配制qPCR反应液，并将所需的cDNA按10倍稀释，然后按照特定比例将配制好的引物和稀释后的cDNA加入到八联管中，准备进行上机测试。上机测试则在LightCycler 96仪器上进行。首先，点击Eject按钮，...
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