相对定量多用于基因差异表达分析、药物疗效考核、耐药性研究、microRNA定量分析、肿瘤基因检测等。相对定量是基因差异表达分析的金标准,通常作为转录组测序分析结果的下游实验,验证目的基因的表达量差异。 实验流程 结果展示 扩增曲线 熔解曲线 基因表达量差异 绝对定量PCR(Absolute Quantification PCR,AQ - PCR)技术是利用...
4) pcr 反应 real time pcr 仪使用 abi7500,pcr 程序已优化 将步骤 3 中已点好样的 pcr 板置于 realtime pcr 仪上进行 pcr 反应:首先是预变形:95℃/10min 第二步是循环反应 40 cycles : 95℃/15s; 60℃/45s(收集荧光) ;72℃/45s 第三步溶解曲线:95℃/15s; 60℃/1min ;95℃/15s 三、 结果...
实时荧光定量PCR方法检测 小鼠脾细胞特定基因的表达 qRT-PCR法检测特定基因的表达 1 实验背景 实时荧光定量PCR的优点是什么? quantitative real-time PCR, qRT-PCR 通过荧光染料标记的特异性的探针,对PCR产物进行标 记跟踪,从而实现实时、定量地对产物进行分析 比较多组细胞或者组织中基因表达差异的分析...
(3)检测PCR产物用到的荧光探针指的是荧光标记的4种脱氧核苷酸(或dNTP)。随着DNA扩增次数的增加,荧光的强度会逐渐增大,荧光信号的变化与PCR产物的形成完全同步。 (4)qRT-PCR是以荧光化学物质测定每次聚合酶链式反应(PCR)循环后产物的总量,qRT-PCR对基因表达的检测仅限于转录水平。翻译的产物是蛋白质,从分子水平检测...
本发明公开了一种适用于qRTPCR法检测基因转录水平表达的扩增基因组合,包括上游引物和下游引物,上游引物选自SEQ ID NO:3,SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:7中的至少一种;下游引物选自SEQ ID NO:4,SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:8中的至少一种.本发明还公开了包含该引物组合的试剂盒以及使用引物组合或试剂盒扩增基因的...
目的运用实时定量PCR(quantitative real-time,qRT-PCR)检测结核分枝杆菌蛋白Ag85B,38kDa及MPT64编码基因的表达水平,探讨结核分枝杆菌耐药菌株和敏感株,北京基因型和非北京基因型的蛋白抗原在转录水平的差异性及qRT-PCR诊断活菌的价值.方法根据Genbank提供的序列,设计目的基因fbpB,psts1,mpt64及内参基因Sigа的特异性...
应用ｑＲＴ－ＰＣＲ检测上述菌株、Ｈ３７Ｒｖ国际标准株ｆｂｐＢ、ｐｓｔｓ１、ｍｐｔ６４基因的表达水平。结果 结核分枝杆菌活菌的扩增结果呈典型的Ｓ型曲线，而结核分枝杆菌死菌和非结核分枝杆菌呈水平直线，没有检测到荧光信号；耐药组中的ｍｐｔ６４基因表达水平低于敏感组及Ｈ３７Ｒｖ标准株，有统计学意义（...
建立实时荧光定量qRT-PCR 方法检测斯氏并殖吸虫不同虫期免疫诊断相关的虫体蛋白 PsMt 01 mRNA的表达,探讨其生物学功能.采用Trizol方法提取虫卵,囊蚴,幼虫,童虫,成虫的总RNA,将其反转录为cDNA,以qRT-PCR方法检测PsMt 01 mRNA的变化.研究表明, PsMt 01 mRNA的表达随发育进程呈现逐步升高,在0～7周的幼虫期... ...
目的比较S100A2, S100A4,S100A6基因在胃癌及其对应正常黏膜中的表达情况.方法应用实时定量RT-PCR构建上述3个基因的定量扩增标准曲线,精确定量3个基 因在20例配对胃癌中的表达丰度并分析它们与胃癌的相关性.结果S100A2,S100A4,S100A6基因相对于β2微球蛋白(β2-MG)基因的表 达丰度分别为2·83×10-4,6·44×1...
有鉴于此,本发明的目的在于提供gapdh和hprt1在qrt-pcr检测进入高原前后血液基因表达的应用,首次对进入高原前和持续低氧环境暴露后血液中的内参基因表达稳定性进行检测,得到持续低氧暴露条件下稳定表达的组合内参基因gapdh和hprt1,并在实际工作得到运用。 为了实现上述发明目的,本发明提供以下技术方案: ...