是的，标准曲线法是绝对定量法 不是，既然用到了内参，就是相对定量了 反转录的时候按照试剂盒的要求转录特定质量的RNA（RNA的浓度可以通过分光光度计测定），反转完后按照推荐的比例稀释产物即可，一般确保你要的基因的Ct值在20~25比较理想 对于同一类生物样本，提取三份RNA（每份RNA都应包含若干不同...
标准曲线,一般是使用已知浓度的,带有目的基因的质粒来做的。你说的那个方法,不是标准曲线,... 本人制作的实时定量PCR标准曲线总不成线性关系,个别样本的... 1、梯度稀释问题(主要引起原因:a加样手法b试用低附着进口耗材)。2、PCR管用高质量PCR管,管身不能做标记。3、RealtimePCR仪器若为顶部激发... 生活饮用...
我在做4个目的基因和一个内参基因qRT-PCR的标准曲线时,扩增效率全部都超过了120%,最高的甚至达到190%。我现在唯一能确定的就是在加样的过程中不同稀释梯度(10倍的梯度)的模板cDNA在加样过程中有相互污染,所以Ct值也不成线性的变化。我现在就是再重新做并严格避免污染,但是除了我确定的这个原因,还有其他的一些...
关于qRT-PCR绝..想请教一下各位,做标准曲线,稀释后涡旋多久呢?我的三个重复的点怎么都不在一起,分散开的,做的也是5个梯度的?着急呀~这次每管涡旋了5分钟,是不是太久了呢?样品是烟草衰老时期的叶片,模板是提取RNA后反
炎症因子qRT-PCR检测标准曲线的建立方法(57)摘要本发明涉及医疗技术领域,公开了类风湿关节炎大鼠炎症因子qRT‑PCR检测标准曲线的建立方法,试验材料包括36只Wistar雌性大鼠、基础日粮、水、牛二型胶原以及甲氨蝶呤,建立方法包括以下步骤:试验动物处理后进行引物设计及合成,依次进行RT‑PCR扩增、测序、建立标准曲线以及...
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要做qRT-PCR,但是不太清楚,1:浓度梯度是用来制作标准曲线的吗?2:是不是内参和每个目的基因都要制作各自的标准曲线?也就是说如果我要作10个基因的话,就要制作内参加目的基因共11个标准曲线?3:怎么确定最适合的cDNA模板浓度呢?4:有说作3个生物学重复,是怎么做?是
本发明提出的类风湿关节炎大鼠炎症因子qrt-pcr检测标准曲线的建立方法,以类风湿关节炎(cia)大鼠为研究对象,通过引物设计、pcr扩增、克隆转化等进行序列测定,并进行blast比对,说明cia大鼠cdk1、cd3d、ralb和relamrna水平检测方法真实可靠,建立类风湿关节炎大鼠炎症因子qrt-pcr检测标准曲线,为后期研究其表达特性提供了准确...
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