通常,在科学实验中,我们会对所研究的目的基因进行表达分析,常用的方法有实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)。有些做RNA-seq的小伙伴,在做完转录组分析之后,一般也都会要求做qRT-PCR来验证二代测序得到的转录本表达是否可靠。这里我们讲一下常用的Livak法(2^-∆∆Ct法)是如何计算的,以及在qRT-PCR中常见问题和解决方...
qRT-PCR和RT-PCR当然不是一种，一般qRT-PCR就是你后边提到的那一串英文，中文叫做实时定量PCR，这个不是半定量，southern杂交和Northern杂交才属于半定量。而RT-PCR通常指的是反转录PCR,英文是reverse transcription PCR，就是先将mRNA反转录成cDNA，然后再以cDNA为模板，用PCR方法加以扩增。半定量：半定...
实际上PCR的引物是不会用RNA的,不只是因为RNA不稳定,RN RT-qPCR基础知识-赛默飞世尔中国官网 RT-qPCR基因表达定量准确性很大程度取决于cDNA模板的质量和数量,因此逆转录对RT-qPCR成功至关重要.所选逆转录酶应具有有效合成cDNA能力,即使是对低丰度基因/难转录RNA...广告 半定量实时PCR的引物可以做普通PCR的引物吗...
还是选择用qPCR来解决问题。再比如有些时候样品不够多，蛋白提不够，这时候用mRNA反转更好做一些。