做完转录组分析之后,一般都要求做qRT-PCR来验证二代测序得到的转录本表达是否可靠。荧光定量PCR是一种相对表达定量的方法,他的计算方法有很多,常用的相对定量数据分析方法有双标曲线法,ΔCt法,2^-ΔΔCt法(Livak法),用参照基因的ΔCt法和Pfaffl法。这里主要讲解常用的2^-ΔΔCt法(Livak法)如何计算; qRT-PCR原...
2 qRT-PCR计算mRNA相对表达量计算 可以根据如下格式排列自己的数据,然后根据不同颜色的指引,进行△Ct,△△Ct,2^-△Ct的计算,最后得出mRNA的相对表达量(已经非常详细了,能看懂了吧,对于初学者,文末会将excel上传,大家可以跟着模拟学习,其它数据一般来说是触类旁通!!!)。 (图2 △Ct,△△Ct,2^-△Ct计算方法...
当然,此公式适合于所有2–ΔΔCT 法的荧光定量。 经我修改后计算模板: Quantitative PCR calculation template for QuantStudio(TM) 7 Flex System_J.F.XIE(均值法) .xls https://pan.baidu.com/s/1qiubuZxm0y_3F6VYP0obJg Extract code:hybr 案例展示 以吉玛生物公司试剂说明书案例为例,来计算 microRNA ...
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而现在我们现在用的这款仪器QuantStudio 7 Flex Real-Time PCR System是无法计算的,所以需要自己手动计算,理解原理更容易操作。当然,此公式适合于所有2–ΔΔCT 法的荧光定量。 经我修改后计算模板: Quantitative PCR calculation template for QuantStudio(TM) 7 Flex System_J.F.XIE(均值法) .xls ...
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