一、逆转录(RT-PCR) 2.1 基因组DNA去除,配置混合液 根据说明书配置混合液去除基因组DNA,用移液器轻轻吹打混匀,进行离心。42℃反应2min。 2.2配置第一链cDNA合成反应液 配置第一链cDNA合成反应液,用移液器轻轻吹打混匀。 2.3 第一链cDNA合成反应 不同试剂盒条件不一样,进行cDNA合成反应。 二、RT-qPCR操作 离...
准备qPCR反应体系,包括cDNA模板、引物、dNTPs、DNA聚合酶、缓冲液等。可选的是加入荧光标记物,如SYBR Green,用于实时监测PCR扩增。 qPCR循环 ♾️ 最后是qPCR循环步骤。初始变性、退火和延伸这些步骤都可以在荧光定量qPCR仪中进行。关于方法的选择:高扩增效率选择三步法,高特异性选择两步法。希望这些步骤能帮到你...
🔍 Ct值出现过晚?可能是PCR产物太长或扩增效率低,调整一下实验条件吧!🔍 CDNA模板浓度低?减少稀释度,重复实验,效果可能会更好哦!🔍 实验新手也能轻松上手,快来试试这份qRT-PCR实验手册吧!0 0 发表评论 发表 作者最近动态 西柚冰激凌 2024-12-31 协和双语七大校区全解析,你知道几个?嘿...全文 西柚冰...
用核酸清洁剂擦拭移液枪和台面,确保所有试剂、耗材处理彻底,保证无酶环境。 一、细胞中RNA提取 1.1裂解:添加Trizol破坏细胞释放RNA 每5-10x106个细胞1mL trizol,置于冰盒上。 1.2萃取:添加氯仿使混合物分组 …
qRT-PCR实验主要分为两部分，即qPCR（实时荧光定量PCR）反应和上机测试。首先，需要按照说明书中给出的比例精确配制qPCR反应液，并将所需的cDNA按10倍稀释，然后按照特定比例将配制好的引物和稀释后的cDNA加入到八联管中，准备进行上机测试。上机测试则在LightCycler 96仪器上进行。首先，点击Eject按钮，...
Biorad CFX96 qRT-PCR仪器的使用(全视频版)黑马UQ编辑于 2023年10月17日 20:03 ===加样指示图与预混液配置=== 因为预混液离心后会有体积改变,所以如果想做8联管中的8管,应该配置12管需用的量,故要乘12倍。 内参基因请结合各课题组习惯及物种选用。 分享至...
本文将深入解析实时荧光定量PCR中的关键步骤，包括RNA提取、浓度测定和cDNA反转录。1. RNA提取首先，弃去细胞培养液，使用PBS清洗后，每孔加入RNAiso Plus。随后，提取步骤涉及氯仿处理，将RNA与上清液分离。将上层水相转移到新的去酶EP管，加入异丙醇，静置后离心，再用无水乙醇进一步纯化RNA，形成白色沉淀...
qRT-PCR,是Quantitative Real-time PCR的简称,也叫实时荧光定量PCR,是一种在 DNA扩增反应中,以荧光化学物质测定每次聚合酶链式反应(PCR)循环后产物的总量,通过 内参或者外参法对待测样品中特定DNA序列进行定量分析的方法。 qRT-PCR目前已成为不同样本间进行基因表达水平差异比较权威的方法。然而不适当的实 验设计,...
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