通常，在科学实验中，我们会对所研究的目的基因进行表达分析，常用的方法有实时荧光定量PCR法（qRT-PCR）。有些做RNA-seq的小伙伴，在做完转录组分析之后，一般也都会要求做qRT-PCR来验证二代测序得到的转录本表达是否可靠。这里我们讲一下常用的Livak法(2^-∆∆Ct法)是如何计算的，以及在qRT-PCR中常见问题和...
有些做RNA-seq的小伙伴,在做完转录组分析之后,一般也都会要求做qRT-PCR来验证二代测序得到的转录本表达是否可靠。这里我们讲一下常用的Livak法(2^-∆∆Ct法)是如何计算的,以及在qRT-PCR中常见问题和解决方案。 qRT-PCR的原理: 以基因的cDNA为模板进行PCR扩增,在PCR扩增过程中,荧光信号的强度与扩增产物...
通常,在科学实验中,我们会对所研究的目的基因进行表达分析,常用的方法有实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)。有些做RNA-seq的小伙伴,在做完转录组分析之后,一般也都会要求做qRT-PCR来验证二代测序得到的转录本表达是否可靠。这里我们讲一下常用的Livak法(2^-∆∆Ct法)是如何计算的,以及在qRT-PCR中常见问题和解决方案。
通常,在科学实验中,我们会对所研究的目的基因进行表达分析,常用的方法有实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)。有些做RNA-seq的小伙伴,在做完转录组分析之后,一般也都会要求做qRT-PCR来验证二代测序得到的转录本表达是否可靠。这里我们讲一下常用的Livak法(2^-∆∆Ct法)是如何计算的,以及在qRT-PCR中常见问题和解决方案。
转录组结果不准确: 1.查看插入片段随机性分布,是否存在5'端严重降解? 2.查看比对效率是否正常?查看样本间的相关性系数,是否存在组内小于组间? 3.分析差异表达的基因的readcount一般在多少比较比较合适? 一般认为多个样本中,至少有一个样本的3次生物学重复的readcount≥10; 如果进行RT-pcr验证,建议选择至少有一个...
转录组测序(RNA-seq)将细胞内某一类型(或全部)的RNA逆转录成DNA,通过高通量测序的方法测定其序列并统计其表达水平的一项技术。是检测基因表达变化的通用方法。qRT-PCR 是指通过对 PCR 扩增反应中每一个循环产物荧光信号的实时检测从而实现对起始模板定量及定性的分析。
qRT-PCR相对定量计算详解 做完转录组分析之后,一般都要求做qRT-PCR来验证二代测序得到的转录本的表达是否可靠。荧光定量PCR是一种相对表达定量的方法,他的计算方法有很多,常用的相对定量数据分析方法有双标曲线法,ΔCt法,2^-ΔΔCt法(Livak法),用参照基因的ΔCt法和Pfaffl法。这里主要讲解常用的2^-ΔΔCt法(Liv...
做完转录组分析之后,一般都要求做qRT-PCR来验证二代测序得到的转录本表达是否可靠。荧光定量PCR是一种相对表达定量的方法,他的计算方法有很多,常用的相对定量数据分析方法有双标曲线法,ΔCt法,2^-ΔΔCt法(Livak法),用参照基因的ΔCt法和Pfaffl法。这里主要讲解常用的2^-ΔΔCt法(Livak法)如何计算; ...
qRT-PCR相对定量计算详解 qPCR 实时定量PCR也转录组结合,计算表达量等等; 做完转录组分析之后,一般都要求做qRT-PCR来验证二代测序得到的转录本表达是否可靠。荧光定量PCR是一种相对表达定量的方法,他的计算方法有很多,常用的相对定量数据分析方法有双标曲线法,ΔCt法,2^-ΔΔCt法(Livak法),用参照基因的ΔCt法和...
这是一篇关于大泷六线鱼无参考基因组的转录组项目文章,影响因子为3.185。本文对正常和病菌感染的大泷六线鱼脾脏进行RNA测序并对测序结果进行qRT-PCR验证,文章内容简单,结果转化率却很高,可为其他客户提供一个很好的借鉴和参考。 测序材料:对照组(TG)和病菌感染组(CG),每组3个重复,每个重复由5条鱼混样 ...