浙大学姐手把手教你做qRT-PCR,全网最最详细版!包会的那种#研究生日常 #实验室日常#qpcr #实验教学 #科研狗的日常 - 八一今天做实验了吗于20240929发布在抖音,已经收获了7.4万个喜欢,来抖音,记录美好生活!
〖科研笔记〗q-PCR实验步骤。“四大步”,走完qRT-PCR完整实验流程! #qpcr #科研 #生物 #知识科普 #科研学习 - 华睿康生物试剂于20240814发布在抖音,已经收获了40个喜欢,来抖音,记录美好生活!
在进行qRT-PCR实验之前,确保实验环境无酶是非常重要的。首先,用核酸清洁剂彻底擦拭移液枪和台面,以确保所有试剂和耗材的处理都是干净的。一、细胞中RNA提取 🧬 裂解细胞:每5-10x106个细胞加入1mL Trizol,放在冰盒上,用Trizol破坏细胞并释放RNA。 萃取混合物:按氯仿:Trizol=1:5的比例加入氯仿(0.2ml),剧烈振荡...
🔬实验步骤: 样本采集与处理:确保RNA的完整性。 RNA提取:严格按照试剂盒操作。 反转录:合成cDNA。 配置qRT-PCR反应体系:加入引物等。 扩增反应:设置合适的程序,上机进行扩增。📊数据分析: 软件选择:使用合适的软件(如Bio-Rad CFX Manager等)。 Ct值分析:通过相对定量(如2⁻ΔΔCt法)计算基因表达差异。📚...
🔍 实验步骤概览:从RNA提取到qPCR分析,每一步都有详细指导。🔍 常见问题及解决方案:遇到难题?这里有解决方法帮你轻松搞定!🔍 RNA质量评价:如何判断RNA浓度和纯度?这里有实用技巧。🔍 内参基因与目的基因Ct值异常?别担心,这里有解决方案。🔍 重复性差?可能是移液枪不准或qPCR预混液未混合均匀,试试这些小...
准备qPCR反应体系,包括cDNA模板、引物、dNTPs、DNA聚合酶、缓冲液等。可选的是加入荧光标记物,如SYBR Green,用于实时监测PCR扩增。 qPCR循环 ♾️ 最后是qPCR循环步骤。初始变性、退火和延伸这些步骤都可以在荧光定量qPCR仪中进行。关于方法的选择:高扩增效率选择三步法,高特异性选择两步法。希望这些步骤能帮到你...
【荧光定量PCR(qPCR)】实验操作详解及数据处理(2- ΔΔCt法)附运算表格模板 2.2万 8 52:21 App 如何判定荧光定量(q-PCR)下机数据的有效性-1 5059 -- 1:02:42 App 荧光定量PCR从入门到精通 6.5万 31 6:01 App 什么是实时荧光定量PCR技术 4.9万 27 13:34 App RT-qPCR详细步骤 6781 -- 1:1...
1. 实验前准备 在进行qRT-PCR实验之前,需要准备以下材料和设备: - RNA样本:提取需要研究的组织或细胞中的总RNA。 - 逆转录试剂盒:包括逆转录酶、随机引物、dNTPs等。 - PCR试剂盒:包括聚合酶、引物、dNTPs等。 - qRT-PCR仪器:包括逆转录仪和实时荧光定量PCR仪。 - 实验耗材:包括离心管、PCR管、PCR板等。
下面普健生物就从8个方面带你详细了解一下qRT-PCR的注意事项,以提高你的实验成功率。 1、实验设计 由于RNA易降解,对外在环境敏感,因此在实验条件或样本操作等各个环节都需要严格把控。 2、RNA抽提 RNA的抽提环境非常关键。由于RNA酶无处不在和其难以灭活的顽固本性,在实验的每一步,任何偶然的疏忽或不妥当的操作...