最最最重要的是特异性(即只能扩增需要检测的基因),其他规则(1)引物长度为20- 21 bp;(2) 避免引物中连续出现5个或以上相同碱基,例如AAAAA或GGGGG;(3)每条引物两端的碱基最好是G或C(GC碱基之间为三个氢键连接,保证引物与模板连接的稳固性);(4) GC含量为45%~55%;(5)PCR产物大小为85~300 bp;(6)引物尽...
(图1 引物扩增示意图。 PCR基因扩增方向和体内合成方向是一致的,即从5'端到3'端。) 引物设计也应该注重以下规则:引物的结构应相对简单,不含内部二级结构,避免内部折叠;我们还需要避免引物-引物退火,它会产生引物二聚体并破坏扩增过程;在设计时,如果不确定在引物的某个位置放置什么核苷酸,可以在该位置包含多个核苷...
1.将自己的目的基因(cDNA)序列粘贴至https://www.genscript.com/tools/real-time-pcr-taqman-primer-design-tool 选取最大的一条(出现非特异性扩增的概率低,序列长度长匹配到的基因更稳)将上游引物及下游引物放入NCBI——Blast 目的:是否为非特异性扩增,尤其是基因家族基因相似度高,出现非特异性扩增的可能性更大...
2.2 qRT-PCR 引物设计方法 如图所示,我们一般进行定量的方法都是SYBR Green ,里面也可以选择TagMan进行引物设计。 这里介绍的是Beacon Designer 软件设计引物的方法。 根据引物设计原则可以更高GC含量,引物长度,Tm值,产物长度等等。 下面再介绍一种使用primer3Plus 设计引物,Primer Blast 进行引物特异性验证的方法。 首...
一个是我们实验室pcr仪器导出的结果是Cq值,请问这个跟Ct值是一个意思吗? 二是我的实验有1个模型组+4个不同浓度的给药组+1个正常组,一共6个组,需要检测2个基因,不知道96孔板应该怎么设计。我目前想的是每组选2个样本,一共12个样本,在一个板子上跑,然后跑三块板,相当于每组跑了6个样本,这样设计可以吗?
QRTPCR引物设计概述:在QRTPCR过程中,由于涉及到模板定量,所以要求引物特异性强,并且不能扩增出基因组DNA如果用DNA酶处理干净另当别论,所以要求跨外显子设计可以不用考虑基因组DNA污染,或跨内含子设计检验DNA酶是否处理干净,即
锐博生物提供自主研发的circRNA qRT-PCR Starter Kit和circRNA qRT-PCR Primer,已广泛应用于环状RNA的表达及差异分析实验中。 我要订购 下载说明书 产品优势 1、引物背向设计, 扩增产物跨反向剪切位点(back splice site) 2、扩增效率高, 特异性强 3、灵敏度高, 易于检测 订购产品 产品说明书下载 尚无相关...
之前分享了荧光定量PCR的引物设计【分享一个qRT-PCR引物设计软件【Beacon Designer 8.14】】，最近开始...
1. 上下游引物的长度一般为18-30bp之间,且Tm值在58-62℃之间,上下游引物的Tm值相差最好不超过2℃。 2. GC=30-80%; 3. 应避免引物中多个重复的碱基出现,尤其是要避免4个或超过4个的G碱基出现。引物的3’端最好不为G或/和C。引物3’端的5个碱基不应出现2个G或/和C。 4. PCR扩增产物长度:引物的...
可以通过 qRT-PCR 的溶解曲线,但是呢,这个还是要耗钱的。对于没有很多钱的实验室来说,在拿到很多引物的时候,可以通过普通的 RT-PCR 看看是否是单一条带,鉴定一下引物的特异性。如果实验室不差钱,则可以通过溶解曲线对所有的引物的特异性做一次鉴定。