miRNA:茎环法原理:由于miRNA全部为23nt左右的短序列,无法进行直接PCR检测,所以使用了茎环序列这个工具,茎环序列是一段50nt左右单链DNA,可以自身形成发卡结构,3’末端可以设计成与miRNA部分片段互补的序列,那么在反转录时就可以将目的miRNA连接到茎环序列上,那么总长度就达到70bp,就符合qPCR确定的扩增产物的长度。加尾...
1.1 qRT-PCR原理与应用 实时定量反转录PCR (Real-Time Quantitative Reverse Transcription PCR)是PCR技术的一项重大发展,它能够对PCR过程中每个周期产生的产物进行可靠的检测和定量检测。在引入寡核苷酸探针(qPCR引物)后,使得这种技术成为可能,寡核苷酸探针被设计用于在目标序列内杂交。由于Taq聚合酶的5'核酸酶活性,在PC...
qRT-PCR的原理：以基因的cDNA为模板进行PCR扩增，在PCR扩增过程中，荧光信号的强度与扩增产物的数量成正比。通过实时检测PCR扩增过程中荧光信号的变化，可以获得关于相对定量基因表达水平的信息。qRT-PCR一般包括SYBR染料法和Taqman探针法。例如，SYBR染料游离时发出的荧光信号微乎其微，但当其与双链DNA的小沟结合后，荧...
4、qRT-PCR 反应：设计并合成引物，随后以 cDNA 为模板，使用细胞炎性因子的特异性引物进行 qRT-PCR 扩增反应。反应完成后，确认扩增曲线和融解曲线，对标准曲线进行分析。5、数据分析：使用 qRT-PCR 仪检测荧光信号，导出 Ct 值，以β-actin 作为内参基因，采用 2-△△CT 法来计算细胞炎性因子的表达水平。五...
qRT-PCR原理: 以基因的cDNA为模板进行PCR扩增,在PCR扩增过程中,通过收集荧光信号,对PCR进程进行实时检测。由于在PCR扩增的指数时期,模板的Ct 值和该模板的起始拷贝数存在线性关系,所以可以定量。 Ct值是什么意思呢? Ct 值的含义是:每个反应管内的荧光信号达到设定的域值时所经历的循环数 (cycle)。 qRT-PCR在扩...
qrt-pcr原理qrt-pcr原理 即时定量逆转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)是一种广泛应用的分子生物学技术,可快速、准确地检测和定量RNA或DNA样本中的特定序列。它是基于传统的聚合酶链式反应(PCR)技术的改进,使其能够在反应过程中实时监测DNA或RNA的连接数量,并以定量方式反映起始的模板数量。 RT-qPCR的原理涉及两个主要...
qRT-PCR，全称定量逆转录聚合酶链式反应，其核心原理是通过逆转录酶将RNA模板转化为cDNA（互补DNA），然后通过荧光探针或SYBRGreen等技术进行定量分析。具体过程如下：首先，RNA模板在逆转录酶的协助下，通过特异性引物形成cDNA，确保只转录目标mRNA。接着，荧光染料探针或SYBRGreen等工具参与进来，通过PCR（...
实时荧光定量PCR是一种分子生物学技术，它通过监测PCR反应过程中荧光信号的强度来实时监测目标基因的扩增情况，并通过对荧光信号的定量分析实现对目标基因表达水平的精确测定。原理详解：1. PCR扩增过程：在PCR反应过程中，随着反应的进行，目标基因片段不断扩增，复制产生更多的DNA分子。2. 荧光标记与检测：...
🔬 原理:qPCR技术通过特异性引物扩增目标DNA序列,并利用荧光探针或SYBR Green I荧光染料法检测PCR产物的数量,从而定量分析样品中目标序列的数量。这种方法快速、准确、高灵敏且高特异性。 📚 用途:广泛应用于基因表达分析、突变检测、病原体检测等领域。 🧪 材料与仪器: 试剂:RNA提取试剂盒、反转录试剂、qRT-PC...