RT-PCR就是逆转录或称反转录PCR(reverse transcription PCR),是聚合酶链式反应(PCR)的一种广泛应用的变形,基本概念就是一条RNA链被逆转录成为互补DNA,再以此为模板通过PCR进行DNA扩增。 qRT-PCR(Quantitative Real-time PCR)是实时定量PCR,指的是PCR过程中每个循环都有数据的实时记录,由此可以对起始模板数量或最终...
RT-PCR就是逆转录或称反转录PCR(reverse transcription PCR),是聚合酶链式反应(PCR)的一种广泛应用的变形,基本概念就是一条RNA链被逆转录成为互补DNA,再以此为模板通过PCR进行DNA扩增。 qRT-PCR(Quantitative Real-time PCR)是实时定量PCR,指的是PCR过程中每个循环...
quickQrtPCR是一款shiny app,可以根据实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR)下机产生的Ct(cycle threshold:QPCR扩增过程中,扩增产物的荧光信号达到设定的荧光阈值时所对应的扩增循环数)值,计算不同样本基因的相对表达量,同时,也可以快速计算定量引物扩增效率。 这款APP如何构建 ? 基因的相对表达量计算是基于 2-...
一个是我们实验室pcr仪器导出的结果是Cq值,请问这个跟Ct值是一个意思吗? 二是我的实验有1个模型组+4个不同浓度的给药组+1个正常组,一共6个组,需要检测2个基因,不知道96孔板应该怎么设计。我目前想的是每组选2个样本,一共12个样本,在一个板子上跑,然后跑三块板,相当于每组跑了6个样本,这样设计可以吗?
一、qRT-PCR定量原理 qRT-PCR，即实时荧光定量PCR，就是通过对PCR扩增反应每一个循环产物荧光信号的实时...
Livak法(也称为相对定量法或∆∆Ct法)是一种常用的实时荧光定量PCR(qPCR)数据分析方法,用于分析PCR扩增产物的相对表达量。 Livak法的基本思路是比较不同样品或不同实验组中目标基因的表达量与对照基因的表达量之间的差异。该方法可用于研究基因表达的变化、比较基因的表达水平以及评估RNAi的效果等。
qRT-PCR一般包括SYBR染料法和Taqman探针法。例如，SYBR染料游离时发出的荧光信号微乎其微，但当其与双链DNA的小沟结合后，荧光信号强度会大大增加，表明双链DNA总量也发生了很大变化。在qRT-PCR实验中，Ct值表示每个反应管内的荧光信号达到预设阈值的周期数（cycle）。扩增曲线及溶解曲线如下图所示：扩增曲线主要用于...
为了减少 SYBR 在光下的曝光,个人喜欢先加入模板, 如下图。根据经验,少量模板的加入,容易造成加样误差。所以为了尽量减少加入少量模板造成的误差,我一般会将样本再稀释一倍,加样的时候多加一倍,减少 H2O2的加入量。 图.qRT-PCR 加样示意图 然后配置 qRT-PCR 体系,如下。
为了减少 SYBR 在光下的曝光,个人喜欢先加入模板, 如下图。根据经验,少量模板的加入,容易造成加样误差。所以为了尽量减少加入少量模板造成的误差,我一般会将样本再稀释一倍,加样的时候多加一倍,减少 H2O2 的加入量。 图.qRT-PCR 加样示意图 然后配置 qRT-P...
为了减少 SYBR 在光下的曝光,个人喜欢先加入模板, 如下图。根据经验,少量模板的加入,容易造成加样误差。所以为了尽量减少加入少量模板造成的误差,我一般会将样本再稀释一倍,加样的时候多加一倍,减少 H2O2的加入量。 图.qRT-PCR 加样示意图 然后配置 qRT-PCR 体系,如下。