实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR)/qRT-PCR,是指在PCR反应体系中加入荧光标记物,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过扩增曲线对未知模板进行定量分析的方法。一般用于mRNA转录水平的定量研究、不同样本或基因组中DNA拷贝数的测定、基因芯片结果验证、药效分析等。 Q: qRT-PCR检测对样品有何要求?
qRT-PCR技术 qRT-PCR 逆转录定量PCR（qRT-PCR），是一种应用广泛的研究基因表达模式的方法，尤其是在样品量少或者说非常珍贵的时候。这种方法主要的优点是范围宽、敏感性高、精确度高，无PCR后处理步骤，避免了交叉污染，且产出率高，可以进行多重检测等。技术方法简介 所谓的实时荧光定量PCR就是通过对PCR扩增反应...
实时荧光定量PCR(qRT-PCR)是分子实验室家喻户晓的基因表达定量技术。无论是刚入实验室的菜鸟,还是久经沙场的老手,都需要时不时用一下这个高大上的技术来进行转基因的检测、突变体的鉴定、组织表达的定量或标记基因的表达。对于大多数老手而言,qRT-PCR不过是配一板PCR体系丢到机器里去,静等两个小时结果出来的一个...
实时荧光定量PCR(Real-time PCR, qRT-PCR)是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。 辉骏生物技术优势 1、实时监测:通过扩增曲线能够实时监测PCR产物的积累 2、特异性强:溶解曲线分析可以检测扩增产物的特异性,降低假阳性 3、精确定量:利用...
qRT-PCR即实时定量聚合酶链反应，是在PCR反应过程中，通过实时监测反应产物的荧光信号来定量测定特定DNA或RNA序列的技术。它不仅可扩增目的基因，还能同时获得定量结果。3. Real-Time PCR Real-Time PCR也是一种实时定量PCR技术，与qRT-PCR相似，其通过连续监测PCR反应过程中的荧光信号，实现对核酸的定量...
广义概念的定量PCR技术是指以外参或内参为标准，通过对PCR终产物的分析或PCR过程的监测，进行PCR起始模板量的定量。狭义概念的定量PCR技术（严格意义的定量PCR技术）是指用外标法（荧光杂交探针保证特异性）通过监测PCR过程（监测扩增效率）达到精确定量起始模板数的目的，同时以内对照有效排除假阴性结果（扩增效率为零）...
PCR技术是一种高效复制DNA的方法，通过变性、退火和延伸三个步骤实现。然而，RT-PCR在此基础上进行了拓展，它首先通过逆转录将RNA转化为互补DNA（cDNA），再利用PCR进行扩增，适用于基因表达研究。QRT-PCR是RT-PCR的一种变体，它引入了内参基因的引物，使得目标基因和内参基因同时被扩增。然而，QRT-PCR的...
以下是qRT-PCR操作流程的技术要点: 1. RNA提取 选择合适的组织或细胞样本,并使用适当的方法提取总RNA。 确保RNA的质量和完整性,可以通过琼脂糖凝胶电泳或NanoDrop分光光度计进行检测。 避免RNA降解,操作过程中应尽量减少RNA酶的污染。 2. cDNA合成 使用逆转录酶将RNA逆转录为cDNA。 选择合适的逆转录引物,可以是...
RT-PCR：反转录PCR(reverse transcription-PCR)，是聚合酶链式反应(PCR)的一种广泛应用的变形。在RT-PCR中，一条RNA链被逆转录成为互补DNA（cDNA），再以此为模板通过PCR进行DNA扩增。QRT-PCR在RT-PCR体系中同时加入内参标基因的引物，使目的基因和内参基因在同一条件下同时扩增。在扩增反映结束之后，...