做完转录组分析之后,一般都要求做qRT-PCR来验证二代测序得到的转录本表达是否可靠。荧光定量PCR是一种相对表达定量的方法,他的计算方法有很多,常用的相对定量数据分析方法有双标曲线法,ΔCt法,2^-ΔΔCt法(Livak法),用参照基因的ΔCt法和Pfaffl法。这里主要讲解常用的2^-ΔΔCt法(Livak法)如何计算; qRT-PCR原...
① 非特异性扩增：当PCR反应条件不够好或引物与非目的基因序列匹配时，可能会导致非特异性扩增产物的形成。这种情况下，熔解曲线可能显示出多个峰。可通过优化PCR反应条件（进行温度梯度PCR实验，尝试不同温度和延伸时间）、根据引物设计原则来设计新的引物等方法以增加特异性。② 引物二聚体：引物对之间的非特异性结合...
荧光定量PCR是一种相对表达定量的方法,他的计算方法有很多,常用的相对定量数据分析方法有双标曲线法,ΔCt法,2^-ΔΔCt法(Livak法),用参照基因的ΔCt法和Pfaffl法。这里主要讲解常用的2^-ΔΔCt法(Livak法)如何计算; qRT-PCR原理: 以基因的cDNA为模板进行PCR扩增,在PCR扩增过程中,通过收集荧光信号,对PCR进程...
荧光定量PCR是一种相对表达定量的方法,他的计算方法有很多,常用的相对定量数据分析方法有双标曲线法,ΔCt法,2^-ΔΔCt法(Livak法),用参照基因的ΔCt法和Pfaffl法。这里主要讲解常用的2^-ΔΔCt法(Livak法)如何计算; qRT-PCR原理: 以基因的cDNA为模板进行PCR扩增,在PCR扩增过程中,通过收集荧光信号,对PCR进程进...
通常,在科学实验中,我们会对所研究的目的基因进行表达分析,常用的方法有实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)。有些做RNA-seq的小伙伴,在做完转录组分析之后,一般也都会要求做qRT-PCR来验证二代测序得到的转录本表达是否可靠。这里我们讲一下常用的Livak法(2^-∆∆Ct法)是如何计算的,以及在qRT-PCR中常见问题...
一、qRT-PCR定量原理 qRT-PCR，即实时荧光定量PCR，就是通过对PCR扩增反应每一个循环产物荧光信号的实时...
之前分享了荧光定量PCR的引物设计【 分享一个qRT-PCR引物设计软件【Beacon Designer 8.14】】,最近开始学习荧光定量PCR的结果计算和解读,研究了几天,结合chatGPT, 写了一个Python脚本,使用 Livak法 计算荧光定…
SPSSAU官网-方差分析 双因素方差分析,用于分析定类数据(2个)与定量数据之间的关系情况，例如研究人员性别...
qRT-PCR相对定量数据计算 qRT-PCR实验流程:提取组织/细胞总RNA,以其中的mRNA为模板,利用逆转录酶反转录成cDNA,再进行PCR扩增,通过计算2^-ΔΔct值获得基因表达量。 在这里,我们假设有一个对照组,一个处理组,还有一个内参基因和目的基因,想看一下目的基因在处理组中相对与对...
通常,在科学实验中,我们会对所研究的目的基因进行表达分析,常用的方法有实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)。有些做RNA-seq的小伙伴,在做完转录组分析之后,一般也都会要求做qRT-PCR来验证二代测序得到的转录本表达是否可靠。这里我们讲一下常用的Livak法(2^-∆∆Ct法)是如何计算的,以及在qRT-PCR中常见问题和解决方...