3、淬灭染料引物法：使用荧光标记引物扩增，使荧光标记gene掺入到PCR扩增产物中，从而利用荧光energy共振进...
可能是基线范围设置不当，这种一般是由于模板量过高导致的。建议减小基线的终点值（一般建议设置为Ct值-4...
可能的原因 解决方法 Ct值过大 1.模板浓度低或存在PCR抑制物 2.扩增效率低 1.提高模板浓度;或提高RNA或cDNA稀释比例;或重新制备模板。 2.降低退火温度,或选用二步法扩增;组分和体系充分混匀;优化反应程序;或尝试更换试剂。 Ct值过小 1.模板浓度高 2.NTC和NRC存在污染 3.引物设计不合适 1.减少模板RNA量;或...
模板质量或者扩增效率的差异会造成Ct值偏大或过小。 4.Ct值过大或过小 小翊威逼利诱了我公司技术部的牛牛们,总结出Ct值常见的两类问题的原因和解决方法,以飨读者。
1.如果扩增效率比较高,Ct值降低是自然而然的事情; 2.如果遇到扩增效率大于1,要注意检查引物,它会不会产生二聚体,它的特异性如何,是不是要重新设计,因为扩增效率是根本; 3.扩增效率不高的主要原因有:热启动Taq酶活性不足、dNTP不纯、没有调校好Buffer、以及模板不纯,存在PCR扩增抑制,建议更换试剂盒。 我是No...
可能的原因:模板浓度过高,基线终点值大于 CT 值,仪器默认起峰位置仍为基线期,将起峰位置往基线下拉,所以扩增曲线变成了倒扣的 S 形(左图)。可适当减小基线范围,手动调整基线终点值至 CT 值 -4,调整基线范围后,扩增曲线即恢复正常(右图)。 (5)扩增曲线呈锯齿状断裂 ...
出现原因: 试剂和体系问题:使用试剂、模板被污染;体系中镁离子浓度过高;引物浓度过高; 设计问题:引物设计有问题,产生二聚体和发夹结构。 解决对策: •操作要做规范,避免误操作引起的试剂、模板的污染; •有污染发生及时确定污染源,该丢的赶紧丢掉;
目的基因Ct值出现较晚,可能原因为: ① 目的基因表达量偏低--重新富集RNA ② 目的基因引物扩增效率低: 将模板进行梯度稀释,以确定引物的扩增效率 降低退火温度 重新设计引物 5.扩增曲线异常,如“S”型曲线 1)反应体系引起的扩增曲线不光滑---扩增效率偏差(过高或过低) A. 扩增效率过高 出现非特异扩增或引物二聚...
感谢 ...ct值上升快就是因为你稀释的倍数太大了，所以前辈让你调整稀释倍数