公式为:ΔCt = Ct(目标基因) - Ct(内参基因)。 计算ΔΔCt值: 计算每个实验组样品的ΔCt值与对照组ΔCt均值之间的差值。公式为:ΔΔCt = ΔCt(实验组) - ΔCt(对照组均值)。 计算相对表达量: 使用公式2^-ΔΔCT来计算每个实验组样品相对于对照组的目标基因表达水平。这个值通常表示为相对于对照组的...
ΔCt(对照)=Ct(对照-IL-6)-Ct(对照-GAPDH)=30.1-16.2=13.9 ΔCt(实验)=Ct(实验-IL-6)-Ct(实验-GAPDH)=24.3-16.4=7.9 第一步的校正就完成了,也就是第一组的ΔCt值就有了。 2.2 计算ΔΔCt ΔΔCt=ΔCt(实验)-ΔCt(对照)=7.9-13.9=-6 这样ΔΔCt就有了,你可能会问,为什么是ΔCt(实验)-Δ...
Ct值是荧光定量PCR最重要的结果呈现形式,用于基因表达量差异或基因拷贝数的结果计算。一般情况下,复孔Ct值的差值最好不超过0.05,不然表明误差结果太大,结果不可信。在PCR早期,扩增处于理想情况下,循环数较少,产物积累少,产生荧光的水平不能与荧光本底背景明显的区别;之后...
例如这里的Control组Ct值是:13.38、13.60和15.80时,我们选择用几何平均值: 4. 计算ΔΔCt值。用每个样品所得的ΔCt减去第三步的平均ΔCt。 5. 计算 2^-(∆∆Ct)值,即为每个基因的相对表达量 最后在统计分析的时候,直接使用 2^-(∆∆Ct)值进行分析可能不会呈现正态分布且偏态严重,这时候可以用log...
“Delta”代表两个值之差。在2–∆∆Ct公式中，首先计算实验组和空白组的ΔCt值，再用实验组的ΔCt减去空白组的ΔCt得到ΔΔCt。其中，ΔCt由目的基因Ct值减去内参基因Ct值得到。内参基因，也称为管家基因，是一类在不同条件和时间下稳定高表达的基因。常见的内参基因包括β-Actin、...
具体的计算公式为: △Ct= Ct(目的基因)- Ct(内参基因) △△ Ct= △Ct(实验组)- △Ct(对照组) RQ=2^-△△Ct 假设上面研究光诱导对拟南芥AtSUC2基因表达影响的实验中,qPCR的结果如下: 计算时,首先我们把对照组的2^-△Ct数据求平均值(上图中为0.00116),然后用2^-△Ct中的每一个数据除以这个平均值,...
这个qPCR计算2^-△△Ct是万能模板,如下是计算每个样本目的基因的🔺CT(看箭头的公式): 接着是用POWER函数计算每个样本目的基因的2-🔺CT(看箭头的公式): 再计算对照组的平均值2-🔺CT: 最后用每个样本的2-🔺CT除以对照组的平均值2-🔺CT...
PCR扩增产物量 = 起始模板量 × 2^Ct 起始模板量 = PCR扩增产物量 / (2^Ct) 起始模板量 = PCR扩增产物量 × 2^(-Ct) 当PCR扩增产物量达到同一水平时,对应的Ct值不同,原因在于起始模板量不同。而当样本和内参基因的PCR扩增产物量相同时,如果要算出它们对应起始模板量的比值差,就需要进行除法计算。 待...
qpcr ct值的范围为15-35。Ct值小于15，认为扩增在基线期范围内，未达到荧光阈值。理想情况下，Ct值与模板起始拷贝数的对数存在线性关系，也就是标准曲线。通过标准曲线，扩增效率为100%时，计算出基因单个拷贝数定量的Ct值在35左右，若大于35，理论上模板起始拷贝数小于1，可认为无意义。