1)加样误差导致,建议移液器定期校准,另外可通过扩大反应体系或提前配制好预混液优化。 2)模板量低,建议提高模板量,使Ct值落在15-30之间。 3)仪器长时间未校准,建议定期进行仪器校准保养。 Part2 熔解曲线异常 熔解曲线常用来判断qPCR结果的特异性,理想的熔解曲线为单峰,异常的熔解曲线可能会出现双峰、杂乱等情况...
解决方法:如果融解曲线没有杂峰,无模板阴性对照同目的基因的 CT值为 3 or 5 以上,那CT值为准确的,可多设置几个复孔,选择重复性好的CT值参与计算。 (2)CT<30,重复性较差。这种情况一般同操作有关。 解决办法:从以下几个方面进行问题的排查: 加样准确度; 移液器吸取液体的准确度; 定期校准 qPCR 仪。 加...
1.细胞提RNA逆转录作模板，OD值浓度都挺好，但qPCR以ACTB内参的Ct值到31；2.在1的基础上提高了模板...
可将基因的扩增产物进行梯度稀释(至少三个梯度,且梯度之间的 △CT均一,防止因为操作原因导致标准曲线线性关系差,进而影响扩增效率的计算),同时进行 qPCR。将得到的标准曲线进行引物扩增效率的计算。 关于引物扩增效率的计算,可参考下面的案例: ① qPC...