QPCR退火温度和熔解曲线程序设定,熔解温度(Tm)是引物的一个重要参数。这是当50的引物和互补序列表现为双链DNA分子时的温度。Tm对于设定PCR退火温度是必需的。在理想状态下,退火温度足够低,以保证引物同目的序列有效退火,同时还要足够高,以减少非特异性结合。合理的退火温度从55度到70度。退火温度一般设定比引物的Tm...
Tm值:是引物与模板DNA完全配对时50%双链和50%单链状态下的温度。 退火温度:是在qPCR循环中,当引物与模板DNA结合时所设定的温度。 2. 理想退火温度: 通常建议将退火温度设置在比引物Tm值低3-5°C左右。这样做是为了确保引物能够有效地与模板DNA结合,同时保持足够的特异性,减少非特异性扩增的可能性。 例如,如果...