设计qPCR引物时，通常要留意以下几点：引物尽量要跨内含子设计、产物长度100~300bp、Tm值尽量接近60℃且上下游引物尽量接近、引物末端是G或C等等。1. 引物跨内含子设计 在设计qPCR引物时，选择跨内含子设计的引物可以使gDNA模板不能得到扩增，产物均来源于cDNA的扩增，这样也就去除了gDNA污染造成的影响。2. 引物长...
1.PCR扩增产物长度 :80-150bp. 引物的产物大小不要太大,一般在80-250bp之间都可;80-150bp最为合适(可以延长至300 bp) 2.引物长度一般在15-30碱基之间。 引物长度(primer length)常用的是18-27bp,但不应大于38bp,因为过长会导致其延伸温度大于74℃,不适于Taq DNA 聚合酶进行反应。 3.引物GC含量在40%~...
所以正确设计出引物是qPCR成功的第一步。 首先,我们知道qPCR是特殊的PCR,所以,qPCR的引物设计要满足一般PCR引物设计的原则,见下表。 除此之外,qPCR引物设计需要额外注意几点。 1. 扩增片段长度: 扩增效率随着扩增子长度减小而增大,建议扩增产物最好在80-200bp的范围,若产物小于75bp,扩增子很难与引物二聚体区分开...