qPCR引物设计的原则和注意事项包括: 1.选择稳定的Tm值:qPCR引物的Tm值应在60°C - 63 °C,它应尽量接近被检测目标序列的Tm值; 2.尽量降低引物间的胁迫竞争性作用:两个引物之间如果存在太多高度相似的区域,会导致引物间的竞争性作用,影响qPCR结果; 3.避免引物之间的碱基配对:引物末端的碱基是控制引物稳定性的关...
qPCR引物设计的原则是:1)选择被检测序列的5’端两个核苷酸作为引物的开始;2)采用20-23bp的长度,保证引物的灵敏度和特异性;3)引物的Tm值应位于55-60°C,以确保引物有足够的结合力;4)尽量避免引物中存在重复序列;5)尽量避免引物中存在非特异性结合位点。 在设计qPCR引物时,应注意以下几点:1)选择被检测基因序列...
避免二级结构原则:引物内部应避免形成发夹结构、茎环结构等二级结构,这些结构可能影响引物的杂交效率和扩增效率。 二、qPCR引物设计的注意事项 选择保守区:在设计引物时,应尽量选择基因序列中的保守区域,以提高引物的通用性和稳定性。保守区域通常在不同物种或不同个体间具有较高的相似性。 避免引物间相互作用:在设计...
避免二级结构原则:引物内部应避免形成发夹结构、茎环结构等二级结构,这些结构可能影响引物的杂交效率和扩增效率。 二、qPCR引物设计的注意事项 选择保守区:在设计引物时,应尽量选择基因序列中的保守区域,以提高引物的通用性和稳定性。保守区域通常在不同物种或不同个体间具有较高的相似性。 避免引物间相互作用:在设计...