5. 计算 2^-(∆∆Ct)值,即为每个基因的相对表达量 最后在统计分析的时候,直接使用2^-(∆∆Ct)值进行分析可能不会呈现正态分布且偏态严重,这时候可以用log公式进行转化,再进行后续的统计分析。即:log(2^-(∆∆Ct))。
公式如下: ΔCt = Ct (目标基因) – Ct (参考基因) - 2^-ΔΔCt法 ΔΔCt法是一种更精确的相对定量方法,它通过计算目标基因与参考基因的ΔCt值差异来比较基因表达量。公式如下: ΔΔCt = (Ct (目标基因) – Ct (参考基因))样品A – (Ct (目标基因) – Ct (参考基因))样品B Fold Change = 2...
倍数变化=2-△△Cq此公式用于计算所有待测样本与对照样本之间目的基因表达量的倍数变化,若F值=A(A>1),则代表待测样本相对于对照样本表达量上调A倍;反之若F值=B(1>B>0),则代表待测样本相对于对照样本表达量下调1/B倍。 值得注意的是,2-△△Cq法需保证目的基因和内参基因的扩增效率基本一致才可使用。同时...
ΔΔCT = ΔCT(test) –ΔCT(calibrator) 最后,计算表达水平比率: 2–ΔΔCT = 表达量的比值 计算模板建立 而现在我们现在用的这款仪器QuantStudio 7 Flex Real-Time PCR System是无法计算的,所以需要自己手动计算,理解原理更容易操作。当然,此公式适合于所有2–ΔΔCT 法的荧光定量。 经我修改后计算模板: ...
以ABI 7500为例,qPCR反应程序可参照下表进行设置。此外,荧光标记方式应选择SYBR Green,参比染料需选择ROX。 五、标准曲线制作: qPCR反应结束后,以模板系列稀释倍数log值为X轴,以对应的Ct值为Y轴(反之亦可),制作标准曲线,如下图。 已知浓度的标准品标准曲线制作方法:(以质粒DNA标准品为例。) ...
分析结果。在 qPCR 实验中,通常会设立一个对照组(如阴性对照或标准品),以确定阈值和 PCR 反应效率等。根据对照组的 Ct 值,可以使 用以下公式计算目标 DNA 的相对量(相对表达量或相对浓度):2^-(ΔCt)。 其中,ΔCt 表示目标 DNA 样品组的 Ct 值减去对照组的 Ct 值。
分析结果。在 qPCR 实验中,通常会设立一个对照组(如阴性对照或标准品),以确定阈值和 PCR 反应效率等。根据对照组的 Ct 值,可以使 用以下公式计算目标 DNA 的相对量(相对表达量或相对浓度):2^-(ΔCt)。 其中,ΔCt 表示目标 DNA 样品组的 Ct 值减去对照组的 Ct 值。
这里可以得到公式: 计算-ΔΔCt 在这里,我们有一个对照组,一个处理组,还有一个内参基因和目的基因,想看一下目的基因在处理组中相对与对照中的表达差异,也就是计算-ΔΔCt:数据如下: 1.计算每组内参基因sgAction Ct均值 2.计算第一个 Δct,即每组的待检目的基因减去内参基因的 Ct 值 3.计算对照CK组中 Δ...