可以用同一对引物,同一条探针的话,那我们就认为它在realtimePCR中的扩增效率是一样的,标准曲线只要...
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我最近在做pcr,不过身边没有熟练的人,很多基本问题搞不清楚,希望高手解答1.我用SYBR Green 进行实时定量pcr,看到网上说需要用内参,可是用内参的话,是不是需要用不同的颜色?如果在样本中加了目的基因和内参的引物,可是只有SYBR Green一种染料,不就分不出两种基因了么?还是我理解的不对?2.相对标准曲线的话,怎么...
荧光PCR绝对定量的标准曲线倍比稀释梯度一直不理想(用的进口枪头),从9次方稀释到0次方,2就不好了 以前师姐做的标准曲线很不错(0~9),后来新提质粒就再也做不好标准曲线了,数量级还可以,前面常数差很多,不知道是不是自己操作原因,已经很小心了,郁闷。。。求赐教 网友 1 最佳答案 回答者:网友 1.最好每次...
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请专家在做RT-PCR具体操作上给点建议!谢谢! 网友 1 最佳答案 回答者:网友 随便吹打10次即可,注意每次都要离心一下以免有液体溅到管壁。标准曲线只要能包括你的样品浓度的上下限就行了,不要稀释的太多,否则非特异扩增会增加,如果你是使用Sybr这样的非特异性染料的话,非特异扩增影响会很大。另外你可以把PCR产物...