从Addgene网站购买pX330质粒(http://.addgene/42230/)。 选择针对目的基因的CRISPR/Cas9靶点,具体设计原则见 http://.genome-engineering/crispr/?page_id=23。 实验步骤 1合成下图形式的gRNA靶点特异性的两条引物 对引物首先进行磷酸化处理: 1uloligo1(100 ...