通过使用puromycin选择性地杀死puroR细胞,可以筛选puromycin耐受性的细胞。puromycin筛选细胞的原理可以如下概述: 1. 建立 稳定基因表达系统 在建立基因过表达或沉默的细胞系前,我们需要构建一个稳定的基因表达系统来确保对细胞的影响。 2. 转染额外的基因 为了改变一种基因的表达,我们需要把这个基因从其引物中扩增出来,再可
Puromycin是来源于Streptomyces alboniger的一种氨基糖苷类抗生素，中文名为嘌呤霉素，常用于筛选能够表达pac基因的细胞。pac基因编码嘌呤霉素N-乙酰转移酶(Puromycin N-acetyl-tranferase)，如果表达该基因，就会对嘌呤霉素产生抗性。这一特性目前普遍应用于筛选表达pac基因的哺乳动物稳定细胞株。目前，很多商业化的慢病毒...
puromycin筛选原理 puromycin 使用 使用步骤:(哺乳动物细胞筛选) ?嘌呤霉素杀灭曲线的确定(shRNA稳定转染细胞株,仅作参考) 为了筛选到稳定表达待研究shRNA的细胞株,确定杀死未转染/转导细胞的最低浓度嘌呤霉素至关重要。所以初次做实验的客户一定要建立适合自己体系的杀死曲线(kill curve) 。 (1)24孔板内以5~8 x ...
如使用新霉素抗性,后续即为嘌呤霉素+新霉素抗性筛选(筛选成功后,需同时加入这两种抗性,浓度为筛选时的 1/2~1/4 或更低维持); 如使用荧光蛋白标签筛选,则第二次感染之后需要使用流式分选荧光蛋白表达阳性的细胞,稳转株构建成功后需要嘌呤霉素抗性(浓度为筛选时的 1/2~1/4 或更低维持)。 与单载体系统相比,双...
制浆造纸工程原理课程第四章纸浆的洗涤、筛选和净化 热度: 1 使用步骤:(哺乳动物细胞筛选) ?嘌呤霉素杀灭曲线的确定(shRNA稳定转染 细胞株,仅作参考) 为了筛选到稳定表达待研究shRNA的细胞株,确定杀死未 转染/转导细胞的最低浓度嘌呤霉素至关重要。所以初次做实 ...
使用步骤:(哺乳动物细胞筛选)►嘌呤霉素杀灭曲线的确定(shRNA稳定转染细胞株,仅作参考)为了筛选到稳定表达待研究shRNA的细胞株,确定杀死未转染/转导细胞的最低浓度嘌呤霉素至关重要。所以初次做实验的客户一定要建立适合自己体系的杀死曲线(killcurve)。(1)24孔板内以5~8x10 4 cells/孔的密度铺板,铺足够量的孔...
二、产品原理: PLM-Puromycin试剂是一种由链霉菌中获取的氨基糖苷类抗生素,具有与tRNA分子3’末端类似的结构,可以和核糖体的A位点结合,从而抑制蛋白质合成对革兰氏阳性菌产生抑制作用。可用作筛选含该抗生素的基因质粒,细胞株构建,也可当做抗菌类抗生素使用。
puromycin抗体筛选蛋白翻译抑制因子: 为了筛选MNV编码的蛋白翻译抑制因子,作者将MNV编码的基因转染到HEK-293T细胞中,用10 ug/ml的puromycin处理20min,收样WB用puromycin抗体检测蛋白翻译情况,结果显示NS3能够抑制宿主蛋白翻译。 同样的,将MNV编码的基因转染到Vero细胞中,用10 ug/ml的puromycin处理30min,然后用puromycin抗...
二、细胞筛选步骤 1. 在哺乳动物细胞中进行细胞筛选前,应先进行浓度梯度实验确定适合该类细胞的最佳药物浓度即杀死所有宿主细胞的最低浓度(一般哺乳动物细胞选用的有效浓度范围为1-15 μg/mL)。 2. 细胞转染48 h后,换上加入了适宜浓度嘌呤霉素的新鲜培养基,然后放入细胞培养箱中培养。 3.每隔3-4天换液,更换的...