下拉实验（pull-down assay）是验证体外蛋白互作的主要方式，也是验证没有成熟抗体的蛋白互作的方式之一。通过体外表达亲和蛋白-GST，将亲和蛋白固化在谷胱甘肽亲和树脂上充当“诱饵蛋白”，将细胞或者组织的总蛋白和此“诱导蛋白”混合孵育后可从中捕获“目标蛋白”，最后通过洗脱的方式将“目标蛋白”洗脱后检测，就可以...
详细实验操作步骤:探针法RNA pull-down,这样做!, 视频播放量 3317、弹幕量 1、点赞数 70、投硬币枚数 11、收藏人数 206、转发人数 28, 视频作者 金开瑞生物, 作者简介 实验问题咨询及生物类合作咨询:13343461158; 蛋白抗体、检测分析/分子互作、基因/引物合成各生物领
pull-down方法及蛋白表达纯化 3. Pull-down方法 LB培养基成分：Tryptone 10 g/L Y east Extract 5 g/L NaCl 10 g/L 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解，继续滴加去离子水定容至1 L，高温高压灭菌后，冷却至室温。固体培养基灭菌前加入Agar（15 g/L），含抗生素的LB灭菌后加入1 ml卡那霉素（Kana...
pull-down⽅法步骤汇总 GST-Pull down:1) 利⽤纯化好的蛋⽩进⾏GST-Pull down 实验操作。2) 实验设置2 个组合，第⼀个是实验组(90 µl BP-His +90 µl BRM (689-952aa)-GST)，第⼆个是负对照组(90 µl BP-His + 10 µl GST)，分别在1.5 ml 的离⼼管中混合均匀。3) 加...
1实验目的:用标记了生物素的引物钓取HIF1A基因启动子区序列,后期作为DNA pull down的探针。 2实验材料 l主要试剂 l主要仪器及器材 3基因及载体信息 启动子:HIF1A 种属:人 AGCCTGGCCAACATGGTGAAACCTCGTCTCTACTAAAAATAGAAAAATTATCCGAGTGTGGTGGTGCGTGCCTGTAATCCCAGCTACTTGGGAGGCTGAGGCAGGAGAATCACTTGTACCTGGGAGGCGGAGT...
pull-down试验方法(自己总结) 12、GST蛋白的表达和纯化 12、1 GST蛋白的表达(1) 将表达GST融合蛋白的质粒转入BL21大肠杆菌菌株中。(2) 挑单克隆于3ml LA(LB+Amp)培养基中,37℃摇菌过夜,获得 种子液。(3) 将种子液稀释于50ml2XYTA(YTG+Amp)培养基中,使起始 OD600为0、1。(4) 28℃,220rpm摇菌培养2小...
pull down 实验方法 一、实验准备。 咱得先把实验要用的东西都准备好哈。这个pull down实验呢,需要一些关键的试剂和材料。比如说特异性抗体,这玩意儿可重要啦,就像是一个精准的小导航,能帮咱找到咱想要研究的目标蛋白。还有蛋白A或者蛋白G琼脂糖珠,它们就像是小磁铁一样,能把抗体和目标蛋白给“吸”在一起。
GST Pull-Down实验方法 一、载体构建 两个目的蛋白分别构建至植物原核表达载体上。 二、蛋白表达纯化 1.1质粒转化 质粒转化BL21(DE3)感受态细胞,涂板后37℃倒置培养过夜。 1.2 表达鉴定、优化及可溶性分析 选取单克隆于5管LB培养基37℃培养至菌体OD600为0.6-0.8,加入IPTG至终浓度为0.5mM,培养4h后离心...
1.RNA pull-down 第一天——生物素探针标记RNA 1)前期准备:取出Pierce™ RNA 3' End Desthiobiotinylation Kit,将试剂盒中的PEG及DMSO置于常温,其余组分置于冰上融化,也可将PEG放于37摄氏度融化;打开PCR仪; 2)依照RNA母管含量,用DEPC水溶解RNA,我们通常是10ug/管,用10μl DEPC水溶解。同时溶解试剂盒中Con...
应用Pull-down方法检测草鱼恒定链(Ii)与主要组织相容性复合体(MHC