DNA pull-down实验首先针对靶标区域设计特异性DNA探针,探针经过脱硫生物素标记,跟偶联在磁珠上的链霉亲和素结合;细胞核提取物与磁珠-DNA探针孵育,作用蛋白质分子可以和DNA探针特异性结合;纯化出与靶DNA片段结合的蛋白复合体,经过洗涤可以将非特异性结合蛋白质去除;最后,经洗脱液洗脱,得到目的DNA探针-蛋白质复合物,再...
GST下拉实验原理简介 GST-pull down 技术是一种在体外验证蛋白质相互作用的试验技术，可用来进一步验证酵母双杂交的结果。将靶蛋白与 GST（谷胱苷肽巯基转移酶, Glutathione-Stransferase）融合，使其与谷胱甘肽亲和树脂结合，然后在目的蛋白溶液过柱时，便可从中捕获与靶蛋白相互作用的目的蛋白，洗脱结合物后通过western ...
其原理是利用亲和层析的方法,通过已知的结合子(例如抗体、亲和标签等)选择性地“拉下”目标蛋白,然后识别诱捕蛋白的相互作用分子。这项技术的应用范围包括但不限于疾病诊断、药物研发和基因功能研究等领域。科研人员可以利用pull-down assay技术来筛选具有特定蛋白质结合活性的小分子化合物,为药物设计提供重要参考。 1.2...
它通过利用亲和层析原理,实现对蛋白质间相互作用的检测与分析。本文将结合最新的研究成果,共享关于pull-down assay结果的相关内容,希望对读者有所帮助。 一、实验设计 我们在进行pull-down assay实验时,首先需要选择目标蛋白和其潜在的相互作用蛋白。在实验设计阶段,我们需要明确每个蛋白的结构特点和功能,以便正确选择...
实验原理:利用重组技术将探针蛋白与GST(Glutathione S transferase)融合,融合蛋白通过GST与固相化在载体上的GTH(Glutathione)亲和结合。因此,当与融合蛋白有相互作用的蛋白通过层析柱时或与此固相复合物混合时就可被吸附而分离。 试剂:NaCl, KCl,Na2HPO4,KH2PO4,Triton-100,IPTG(Merck分装),PMSF(Amersco),Cocktaier...
Incubate 3 ~ 5min 後離心 3000-6000 rpm 去掉上清液 Wash 5 min 後離心 3000-6000 rpm 去掉上清液 重複wash 3-5次 volume : 500 μl 使用Elution buffer 將target protein洗下來 Volume : 120μl 使用SDSor western blot 分析結果 Pull-down assay His-Tag or GST-Tag 三.注意事項: 1.此實驗進行時需...
你可以看看 GST-tag ,his- tag,等等pull down assay 的实验原理,虽然这些是针对蛋白的,但是原理一样,记得做好control就行了. 反馈 收藏
染色质免疫共沉淀(Chromatin Immunoprecipitation Assay, ChIP):ChIP是一项比较流行的研究转录因子(transcriptionfactor,TF)与启动子(promoter)相互结合的实验技术。它的基本原理是在活细胞状态下固定蛋白质-DNA复合物,并通过超声或酶处理将其随机切断为一定长度范围内的染色质小片段,然后通过抗原抗体的特异性识别反应沉淀此...
Pull-down assay是一种常用的蛋白质相互作用研究方法，可以用来检测和分析特定蛋白质与其他蛋白质或小分子之间的相互作用。以下是pulldown assay的详细步骤：1、准备试样：收集目标蛋白质及其结合配体的表达系统，如细胞裂解液或组织提取液。选择某一特定结合配体，并将其偶联到亲和树脂上，如琼脂糖珠、琼脂...