Pull down实验,又称拉下实验,是一种体外亲和纯化技术,蛋白Pull down技术可以提供一种诱饵蛋白来特异性识别配体蛋白质,以达到富集、分离、纯化某种配体蛋白质的目的,是体外研究蛋白与蛋白相互作用的有力工具。蛋白质Pull down将被亲和试剂标签(如谷胱甘肽-S-转移酶、组氨酸六肽、生物素)标记的诱饵蛋白固定在某种固体基...
pull-down 实验,即下拉实验,也称为体外蛋白结合实验,用以验证蛋白和蛋白间的互作关系,同时也可以某一蛋白为诱饵,钓取与诱饵蛋白存在相互作用的未知蛋白。 而小分子 pull-down则是在pull-down的基础上,通过化学合成的方法将活性小分子进行修饰,连接上报告分子(如生物素),制备成小分子探针,通过探针分子上的报告分子(...
Pull - down 实验 Pull - down 实验是一种用于研究蛋白质 - 蛋白质相互作用或蛋白质 - 小分子（如核酸、肽段等）相互作用的体外实验技术。它可以验证两个或多个生物分子之间是否存在直接的相互作用关系。通常会将一个已知的蛋白（称为诱饵蛋白）融合表达带有亲和标签（如谷胱甘肽 - S - 转移酶 - GST、组氨酸...
pull-down 实验,即下拉实验,也称为体外蛋白结合实验,用以验证蛋白和蛋白间的互作关系,同时也可以某一蛋白为诱饵,钓取与诱饵蛋白存在相互作用的未知蛋白。 而小分子 pull-down则是在pull-down的基础上,通过化学合成的方法将活性小分子进行修饰,连接上报告分子(如生物素),制备成小分子探针,通过探针分子上的报告分子...
拉下实验又叫做蛋白质体外结合实验（binding assay in vitro），是一种在试管法。简介 拉下实验（Pull-down assay）该实验是一个行之有效的验证酵母双杂交系统的体外试验技术，近年来越来越受到广大学者的喜爱。其基本原理是将靶蛋白-GST融合蛋白亲和固化在谷胱甘肽亲和树脂上，作为与目的蛋白亲和的支撑物，充当一种“...
下拉实验（pull-down assay）是验证体外蛋白互作的主要方式，也是验证没有成熟抗体的蛋白互作的方式之一。通过体外表达亲和蛋白-GST，将亲和蛋白固化在谷胱甘肽亲和树脂上充当“诱饵蛋白”，将细胞或者组织的总蛋白和此“诱导蛋白”混合孵育后可从中捕获“目标蛋白”，最后通过洗脱的方式将“目标蛋白”洗脱后检测，就可以...
1.GST pull down实验原理 GST pull down的主要原理是利用DNA重组技术将已知蛋白与GST融合,而融合蛋白通过GST与固化在载体上的GTH(谷胱甘肽)亲和结合。简单来说,我们假定a蛋白和b蛋白可能存在互作,将纯化的融合GST的a蛋白和纯化的b蛋...
GST pull-down技术的应用主要包括两个方面，一个是与WB实验结合验证两种已知蛋白的直接互作关系，另一个是与质谱结合寻找可能与已知蛋白存在相互作用的未知靶蛋白。GST pull-down一般实验流程 （1）体外表达GST融合蛋白；（2）纯化GST融合蛋白，并固相化；（3）制备待捕获蛋白，可以融合His标签进行原核表达，也可融合...
Pull-down实验基本原理 Pull-down通过将已知蛋白作为诱饵蛋白,用生物素-、PolyHis-或GST-等标签对其进行标记,然后将诱饵蛋白固定在与其亲和的固相支持物上充当诱饵,与蛋白样品或细胞/组织裂解液共孵育,可捕获样品中与诱饵蛋白互作的蛋白,接着通过洗涤或洗脱过程去除其余物质,并将捕获的蛋白回收,进行WB或质谱等检测分析...