5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述正向引物和反向引物分别为sg-F:5'-N20GT-3',其中N20表示PAM序列5’-NGG-3’上游20bp sgRNA靶位点序列;sg-R:5'-n20AA-3',其中n 表示N 反向互补后的序列。 6.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述退火步骤中用的退火体系为:浓度为100μM的所述正向引物...
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