PCR反应一般包括三个步骤:变性、退火和延伸。在变性步骤中,将反应体系加热至94-98摄氏度,使DNA双链解旋成两条单链。在退火步骤中,将反应体系降温至50-65摄氏度,引物与DNA模板结合。在延伸步骤中,将反应体系加热至72摄氏度,Taq DNA聚合酶在此温度下合成新的DNA链。 最后,进行PCR产物分析。PCR反应结束后,可以...
其步骤主要包括样本准备、总RNA/DNA提取、逆转录、荧光定量PCR和数据分析。下面将对每个步骤进行详细介绍。 1.样本准备 在进行pt-qpcr实验之前,首先需要准备好待测的样本。样本可以是细胞、组织、血液等,根据研究的目的来选择合适的样本类型。样本的获取和处理应该符合生物安全规范,并且保证样本的完整性和纯度。 2.总...
鸡源alv血清亚群的ptpcr鉴定.docx,鸡源ALV血清亚群的PT-PCR鉴定 摘要 对动物饲养房用于试验无接种病毒的鸡群进行禽白血病的检测。禽白血病感染的鸡群时常外表健康,但会因抵抗力下降而引发肿瘤病。由于该病难以治疗,效益小,造成经济损失,因此需要查明病因,分清亚群,为
应用逆转录PCR(PT-PCR)技术RT-PCR。RT-PCR 为反转录RCR和实时PCR的共同缩写。是聚合酶链式反应(PCR)的一种广泛应用的变形。在RT-PCR中,一条RNA链被逆转录成为互补DNA,再以此为模板通过PCR进行DNA扩增。 Western Blot Western Blot中文一般称为蛋白质印迹。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验...
操作步骤(仅供参考): 1、制备待测血浆:取新鲜待测静脉血 1.8ml,与 0.2ml 柠檬酸钠抗凝剂(109mM)按9:1轻轻颠倒混匀。(或用含有 1/10 体积的柠檬酸钠抗凝剂的塑料管或硅化玻璃管采血) 2、3000rpm(或 2500g)离心 10~15min,收集上层液(缺乏血小板的血浆),转移至塑料试管或离心管,以防止血小板被激活;同时...
【操作步骤】详情见使用说明书。 1.样品处理(样本处理区) 1.1样本前处理 1.2DNA提取 2.试剂配制(试剂准备区) 3.加样(样本处理区) 4.PCR扩增(核酸扩增区) 5.结果分析判定 实验结果: 6.质控标准 阴性质控品:无明显扩增曲线或无Ct值显示; 阳性质控品:扩增曲线有明显指数生长期,且Ct值≤30; ...
根据NCBI数据库中LIM基因的保守区设计引物SEQ ID No.3:5'-CATGGATCCTCTTCAAGGGAGAACAAGGA-3'和SEQ ID No.4:5'-CGGGAGCTCGCCATGTATGGTAGGAAGGA-3'然后利用RACE-PCR技术(Introgen,RLM-RACE Kit with Manual)获得杨树PtGlim1a基因全长cDNA序列,其具体步骤如下:...
pET 重组子分析 25 用EcoPro™ 系统分析转录/翻译水平 26 质粒模板 26 PCR 模板 26 转录/翻译分析的连接 PCR 28 转录/翻译分析的菌落PCR 29 菌落筛选 29 质粒制备 30 测序 30 IV. 表达目的基因 30 A. 转化表达用宿主菌株 31 B. DE3 溶原菌的诱导 31 诱导的准备工作 31 诱导的操作步骤 31 V. 优化...
本发明提供一种动物体内新型冠状病毒的荧光PT‑PCR检测方法,包括以下步骤:S1、样本采集:从动物体内采集待检测样本;S2、核酸提取:在待检测样本中加入内标,使用核酸提取试剂盒提取待检测样本中的RNA得到样本;S3、PCR试剂准备:在试剂盒中按体积比4:1量取PCR反应液A和PCR反应液B置于离心管中震荡混匀后离心2～10s按15...
摘要 本发明提供一种动物体内新型冠状病毒的荧光PT‑PCR检测方法,包括以下步骤:S1、样本采集:从动物体内采集待检测样本;S2、核酸提取:在待检测样本中加入内标,使用核酸提取试剂盒提取待检测样本中的RNA得到样本;S3、PCR试剂准备:在试剂盒中按体积比4:1量取PCR反应液A和PCR反应液B置于离心管中震荡混匀后离心2~...