在国内首次完成了猪繁殖与呼吸综合征病毒分离毒株的全基因组序列测定.用RT-PCR方法分段扩增出PRRSV北京地区分离株BJ-4株的2l条eDNA片段,分别克隆于pGEM-T-easy质粒载体并进行测序,按顺序将这些序列进行拼接得到PRRSV BJ-4株全基因组eDNA序列.测序结果表明PRRSV BJ-4株基因组全长15 504 b,包含8个开放阅读框,...
首次完成了猪繁殖与呼吸综合征病毒国内分离毒株的全基因组序列测定.用RT—PCR方法分段扩增出PRRSV分离株BJ—4的21条cDNA片段,分别克隆于pGEM—T—easy质粒载体并进行测序,按顺序将这些序列进行拼接得到PRRSV BJ—4全基因组cDNA序列.测序结果表明PRRSV BJ—4基因组全长15504 b,包含八个开放阅读框,5′端有190nt先导...
Syndrome Virus BJ-4 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)BJ-4株ORF2基因的原核表达%Prokaryotic Expression of ORF2 Gene of Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus BJ-4猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)BJ-4株ORF2基因的原核表达%Prokaryotic Expression of ORF2 Gene of Porcine Reproductive and ...
PRRSV strain BJ-4, a kind gift from Dr. Hanchun Yang (China Agricultural University), was propagated in MARC-145 cells, which after 96 h post-infection (p.i.), the cells were frozen and thawed and clarified by low-speed centrifugation, and then the supernatants were stocked at −80 ...
(4) 对于可疑阳性样品,重新抽提核酸,再次进行PRRSV qRT-PCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线,判为样本阳性,表明PRRSV核酸阳性;否则判为样本阴性。九、注意事项:(1) 初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。(2) 所有使用的离心管最好高压灭菌,而且必须不含RNA酶。(3) PCR操作应严格按照要求...
优选地,所述步骤1)具体为:将纯化后的mhis融合n蛋白以碳酸盐缓冲液稀释至5.5μg/ml后加入elisa板中,每孔加100μl,即每孔100ng,4℃包被过夜。 优选地,所述步骤2)具体为:弃去包被液并用pbst洗三遍,每次加入300μl/孔,吸水纸上轻轻拍干残留液体。
对已构建的覆盖猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)BJ-4全长cDNA的6个重组质粒进行测序,并对部分点突变进行定点回复突变,将突变片段顺次连接,获得了全长cDNA克隆pWSK-DCBA.通过体外转录获得病毒基因组RNA,将RNA与脂质体混合后直接转染MARC-145细胞,获得拯救病毒(rV68).rV68能在MARC-145细胞上稳定传代,并可引起PRRSV...
在国内首次完成了猪繁殖与呼吸综合征病毒分离毒株的全基因组序列测定.用RT-PCR方法分段扩增出PRRSV北京地区分离株BJ-4株的21条cDNA片段,分别克隆于pGEM-T-easy质粒载体并进行测序,按顺序将这些序列进行拼接得到PRRSV BJ-4株全基因组cDNA序列.测序结果表明PRRSV BJ-4株基因组全长15 504 b,包含8个开放阅读框,5′...
there was no significant difference between the peak titers of the rescued and parental virus(P>0.05).These results suggest that the full-length cDNA clone pWSK-DCBA of PRRSV BJ-4 is infectious, which provide a basis for further study on molecular pathogenicity and immunity,as well as ...
本发明的降低PRRSV BJ-4株毒力的方法,是连续缺失PRRSV BJ-4株基因组的Nsp2编码区中长度为69nt的核苷酸片段,得到毒力降低的毒株;所述69nt核苷酸片段的核苷酸序列如GenBank Accession Number AF331831的自5′末端第2795至2863位所示.由该降低PRRSV BJ-4株毒力方法制备的病毒rV63的Nsp2缺失21个氨基酸,具有开发成...