1 首先一定要确保“Exon junction span”选项设置为“primer must span an exon-exon junction”,这是为了排除DNA污染。2 产物长度一般设置为90-180为较好。3 Tm值要在60℃左右，且正反引物的值要接近，不能差太远。4 GC含量也要接近，不能差太多，一般在45%-55%之间较好。5 自我配对不能太高。6 越靠前...
荧光定量PCR中,为了消除基因组DNA对实验的影响,引物设计时一般会选择跨内含子;值得注意的是,如果对引物是否跨内含子有要求,必须选择序列登录号的方式导入基因序列,程序才能自动识别外显子的拼接位点。 “No preference”代表无要求,“Primer must span an exon-exon junction”代表引物必须跨越跨内含子,“Primer may ...
1、设计引物 2、验证引物好坏 3、外显子内含子(Exon/intron) 如果设计的引物是跨内含子和外显子的交界处,可在此处设置成为Primer must span an exon-exon junction。外显子的匹配碱基数和内含子的长度等设置一般选择默认。 4、特异性(Specificitycheck) 在specificity check区,选择设计引物或验证引物时的目标数据...
如果你想设计的引物是跨内含子和外显子的交接处,在这里可以设置成primer must span an exon-exon junction。外显子的匹配碱基数和内含子的长度等设置一般选择默认。 (4)特异性(Specificity) 在specificity check区,选择设计引物或验证引物时的目标数据库和物种。这一步是比较重要的。这里提供了7种数据库: RefSeq ...
如果你想设计的引物是跨内含子和外显子的交接处,在这里可以设置成primer must span an exon-exon junction。外显子的匹配碱基数和内含子的长度等设置一般选择默认。 (4)特异性(Specificity) 在specificity check区,选择设计引物或验证引物时的目...
暂时先不要管引物长度） 第三步：选择作为上游引物Select->Forward Primer,然后你会发现下面的序列上有相关引物。首先一定要确保“Exon junction span”选项设置为“primer must span an exon-exon junction”,这是为了排除DNA污染。Tm值要在60℃左右,且正反引物的值要接近,不能差太远。
第一步:新建序列(或者通过Open直接打开序列) 第二步:确定你要设计引物的起始位点,双击下面的序列可以选中一段(暂时先不要管引物长度) 第三步:选择作为上游引物Select->Forward Primer,然后你会发现下面的序列上有相关引物。首先一定要确保“Exon junction span”选项设置为“primer must s...
4 点击进入"Primer-BLAST"5 从第二步的页面复制序列或者序列号，粘贴在第一个框里。修改产物长度，即“PCR product size”,一般为100-200之间最好。还要选择“Exon junction span”为“primer must span an exon-exon junction”,这是为了排除DNA污染。其它的参数都可以不改。6 把网页往下拉到底，点击左下角的...
如果你想设计的引物是跨内含子和外显子的交接处,在这里可以设置成primer must span an exon-exon junction。外显子的匹配碱基数和内含子的长度等设置一般选择默认。 (4)特异性(Specificity) 在specificity check区,选择设计引物或验证引物时的目标数据库和物种。这一步是比较重要的。这里提供了7种数据库: ...
如果你想设计的引物是跨内含子和外显子的交接处,在这里可以设置成primer must span an exon-exon junction。外显子的匹配碱基数和内含子的长度等设置一般选择默认。 (4)特异性(Specificity) 在specificity check区,选择设计引物或验证引物时的目标数据库和物种。这一步是比较重要的。这里提供了7种数据库: ...