mRNA作为一种治疗性或预防性的药物产品，必须依照法规要求进行深入的分析表征。poly A尾在调节mRNA稳定性和翻译效率方面发挥关键的作用，详见图1。图1. mRNA poly A尾在胞浆中调控基因表达的功能概览 研究发现，处于翻译活跃状态的mRNA的poly A尾长度相对较短，仅约30 nt。相比之下，翻译较差的mRNA有相对较长的po...
PolyA尾巴几乎存在于所有的真核生物中，组蛋白是目前唯一已知的可以转录加工产生末端不携带poly A尾巴的mRNA。在细胞核内，mRNA经转录产生后，需要马上经过一系列加工处理完成末端修饰，此过程称为RNA processing。mRNA转录后的修饰对于其从细胞核内输出到成功翻译表达出蛋白的一系列过程来说是必需的。此文先介绍了mRNA ...
斯微生物联合百度开发了一种兼顾mRNA密码子适应指数(CAI)和最小折叠自由能(MFE)的mRNA设计算法,有助于获得结构稳定的mRNA、延长mRNA半衰期和蛋白表达时间窗口,最终提升目标蛋白的表达量。 图3: mRNA序列中CDS优化策略 四、 3' UTR 与5'UTR类似,3'UTR的主要作用是调控mRNA的翻译,与蛋白复合物相互作用,介导mRNA的...
首先我们需要先回顾下3’端polyA尾的功能：保护帽结构不被降解，与polyA结合蛋白、5’ Cap（帽结构）和翻译起始因子蛋白协同作用，启动蛋白质的翻译。多数mRNA的polyA长度为50–200 nt，以维持正常的生物学功能。polyA尾的有无与长度是mRNA药物的关键质量属性之一。当前polyA尾的检测分为两种思路：①与加帽率的分析...
mRNA样本的Poly A酶切处理一般采用Rnase T1酶。T1酶的特异性酶切位点是G碱基右侧的磷酸二酯键，而酶切后的Poly A尾片段回收方式一般有两种：一是直接将Poly A尾片段从mRNA中进行直接分离后上机分析；二是在前一步基础上，再利用Oligo磁珠提取Poly A尾巴片段进行上机分析（LC-MS）。2、案例分析 CASE 01 T1酶...
Poly A尾巴及其相关蛋白在胞质中介导mRNA降解的同时保护细胞核中的mRNA不受酶的破坏。 图2 mRNA闭环翻译模型 Poly A尾巴除了在mRNA转换中起作用外,在mRNA翻译中也起着重要的作用。真核生物存在一个常见的翻译模型:mRNA闭环翻译模型(图2),其认为真核翻译起始因子4E(eukaryotic translation initiation factor 4E,eIF4E)...
一、尾部末端的C取代影响mRNA的蛋白质表达 一般mRNA的尾巴长度在30-70A之间，40nt的长度的尾巴足以使mRNA表达蛋白质。为了研究尾部的非A核苷酸对mRNA蛋白质生产的影响，研究者首先合成了一系列具有40nt尾巴的EGFP mRNA，在3'末端或附近进行不同的单核苷酸取代（图1A）。转染后24小时的相对表达量分析（所有mRNA的表达...
mRNA poly A尾巴的优化 1. 避免poly A尾巴缩短 在细菌扩增过程中,携带长的聚均核苷酸序列的质粒会产生不可预测的重组事件,质粒上的poly A尾巴随着细菌的不断扩增发生缩短,这会对携带过长poly A尾巴质粒的克隆和扩增造成麻烦,因此研究人员展开对携带poly A尾巴的质粒进行一系列的改进,希望可以找到避免poly A尾巴缩...
耀海mRNA业务详情:耀海生物重磅推出mRNA科研级样品定制合成一站式解决方案 参考文献 [1] Kang DD, Li H, Dong Y. Advancements of in vitro transcribed mRNA (IVT mRNA) to enable translation into the clinics. Adv Drug Deliv Rev. 2023 Aug;199:114961. doi: 10.1016/j.addr.2023.114961. ...
polyA尾的作用是维持mRNA作为翻译模板的活性并增加其mRNA本身的稳定性。在自然界中，极大多数真核细胞核内转录的mRNA，马上在其3'末端修饰“加尾”成约有180-200个单一的腺苷酸残基构成的多聚腺甘酸链。多聚腺苷酸的产生不依赖于DNA序列，而是与转录的终止同时进行。