克隆进MISSION® TRC shRNA的pLKO.1转运载体与标准2型质粒（含有rev基因的包装载体和包膜载体）或3型质粒（不含rev基因的载体，包膜载体和rev表达载体）包装系统相容。哪些限制性位点可用来克隆shRNA序列？我之所以对此感兴趣，是因为我希望获得部分shRNA结构，但我是否需要将序列插入到不同的骨架载体？shRNA 克隆进...
克隆进MISSION®TRC shRNA的pLKO.1转运载体与标准2型质粒(含有rev基因的包装载体和包膜载体)或3型质粒(不含rev基因的载体,包膜载体和rev表达载体)包装系统相容。 哪些限制性位点可用来克隆shRNA序列?我之所以对此感兴趣,是因为我希望获得部分shRNA结构,但我是否需要将序列插入到不同的骨架载体?
MISSION® shRNA载体图谱 pLKO.1载体是否是基于HIV的载体?如果是的话,是否存在安全问题? pLKO.1载体载体是基于慢病毒(HIV)的质粒。这种载体被认为是生物安全性2级材料,由于其改良特性(去除了大量蕴含着HIV病毒毒力的附属基因、最大限度减少病毒微粒的基因组含量,无复制能力及自灭活特性)而无法在感染宿主细胞之后产...
shRNA由一条RNA链组成,其中包含一个连接转录终止和起始的逆转座子。一旦转录,shRNA可以通过RNA干扰途径降解或“静默”目标mRNA。在使用pLKO.1构建shRNA时,shRNA序列被插入pLKO.1基因表达载体中,其中包含一个强启动子和运营商,以确保强大和稳定的表达。pLKO.1还包含一个Neo标记,允许对细胞进行筛选以找到已整合载体...
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价格:1500元 联系方式:I47-825O-882O 相关技术服务:质粒构建 基因合成 质粒大提立刻购买 买家导航 pLKO.1-GFP-shRNA载体质粒基本信息 出品公司: 爱迪基因 载体名称: pLKO.1-GFP-shRNA 质粒类型: 慢病毒载体;RNAi载体 高拷贝/低拷贝: 低拷贝 克隆方法: gateway 启动子: U6 载体大小: 7091 bp 5' 测序...
pLKO.1-linc-DC-1-shRNA1是一个大肠杆菌表达载体,Tac强启动子可以驱动GST促溶标签和目的基因融合表达,LacI阻碍蛋白和Laco操作子使本质粒在没有加入IPTG之前禁止表达,防止其影响细菌生长。表达后的融合蛋白可用凝血酶蛋白酶切割,再过一次GST柱子即可清除掉GST标签。
点击设计 5.后续的根据自己的载体手工设计shRNA (以PLKO.1-puro设计,酶切位点AgeI EcoRI,酶切位点后1300bp有一个单一的酶切位点KpnI) 注意:shRNA比较短,而且结构复杂,测序困难,选择载体上的单一酶切位点,设计到shRNA后面,用于后续的单酶切验证。设计模板按照下图 ...
如果有载体自连对照为阴性,可以取两个单克隆提质粒KpnI单酶切,如果有能切出一个1300bp左右的片段,可以认为构建是正确的。 取一个质粒进行测序,测序的时候告知测序公司,此质粒为发卡结构,和poly结构。 附录1. shRNA启动子 多数的siRNA表达载体依赖RNA聚合酶III 启动子(pol III)中的一种,操纵一段45—50nt的发夹...
1300bp左右的片段,可以认为构建是正确的。 取一个质粒进行测序,测序的时候告知测序公司,此质粒为发卡结构,和poly结构。 附录1. shRNA启动子 多数的siRNA表达载体依赖RNA聚合酶III启动子(polIII)中的一种,操纵一段45— 50nt的发夹结构RNA(smallhairpinRNA,shRNA)在哺乳动物细胞中的表达,shRNA在细胞 ...