除此之外,磷酰键的不稳定性也使得样品中磷酸化蛋白质的含量进一步下降。日本广岛大学的Kinoshita等[2]研制出了一种被称为Phos-tag(Phosphate-bindingtag)的磷酸化蛋白质捕获分子。由于Phos-tag在磷酸化蛋白质的分离、富集和稳定等方面优势突出,所以其很快就在各类磷酸化蛋白质的研究中得到了广泛应用。本文综述了Phos...
Phos-tag SDS-PAGE是一种磷酸亲和电泳技术,可使用常规SDS-PAGE程序分离磷酸化和非磷酸化蛋白质。该技术使用分离凝胶,其中丙烯酰胺与作为磷酸捕获分子的Phos-tag Acrylamide共聚。试剂、蛋白质样品制备和电泳操作与常规SDS-PAGE程序相似。由于磷酸化蛋白质在电泳过程中与固定在凝胶中的Phos-tag表现出可逆结合,因此它们的...
传统蛋白磷酸化的研究需要特异的磷酸化抗体、RI 等其它试剂,操作复杂,花费大,且放射性元素会有安全隐患,而 Phos-tag ™ 的出现恰恰可以弥补这些缺点,为磷酸化蛋白研究提供新的方向。 磷酸化蛋白和非磷酸化蛋白利用Phos-tag ™ SDS-PAGE 的分离效果图 Lane 1 为非磷酸化蛋白,Lane 2-5 为磷酸化蛋白,各蛋白...
此后,各种磷酸蛋白质组学研究方法,在使用Phos-tagTM的衍生物后得到了发展。 Phos-tagTM 系列S是特异性结合磷酸化离子的一种功能性分子,具有以下特点: 1.与磷酸离子(2-)的选择性结合能力强于其他阴离子 2.在生理条件下(PH5-8)形成稳定的化合物 1. Phos-tag? Acrylamide Phos-tag? Acrylamide SDS-PAGE可...
蛋白质的磷酸化状态(也称磷酸蛋白组学)对于评估不同的生物和病理过程非常重要。2002年,广岛大学的小池教授及其团队发表了一个双环金属络合物(1,3-bis[bis(pyridin-2-ylmethyl)amino]propan-2- olato dizinc(II) complex) 在中性条件下作可选择性结合磷酸化标签分子,即Phos-tagTM。此后,各种磷酸蛋白质组学研究...
接着作者尝试得到可以直接结合tau,而非通过HaloTag的PhosTAC配体。作者参考正电子发射计算机断层扫描(PET)的方法尝试使用PI-2620作为靶向tau的弹头,并优化了PhosTAC linker的长度,最终得到了Tau2-8分子,其能在10 μM下介导~65%的去磷酸化。 接...
无放射性磷酸化水平的增减内源性蛋白磷酸化分析内在性无需特意制备磷酸化抗体激酶检测转基因小鼠蛋白磷酸化分析激酶级联分析目 录P.3P.4P.6P.13P.16P.17P.21P.25P.26P.28 1.Phos-tag®简介 2.Phos-tag®SDS-PAGE 3.实验流程 4.疑难问题 5.Phos-tagSDS-PAGE条件优化 6.应用与参考文献 7.Q&A 8....
鉴于磷酸化调控的巨大潜力和双功能分子的特殊机制,在前期工作中,胡振一、Po-Han Chen与Craig Crews教授合作开发了PhosTAC技术, PhosTAC延续PROTAC开创的双功能分子技术,具有高效、精准调节蛋白功能等优点。前期工作中科研人员提出并验证了...
DUBTAC是一个巨大的机会,但开发之路并不容易。蛋白降解剂在蛋白表面的任意位点加上泛素化标签即可发生降解。而去泛素化需要剪断正确的泛素化基团才能达到预期。 翻译后修饰调控技术 来自Broad Institute 的 Amit Choudhary、Stuart Schreiber等人开发了可以对靶蛋白磷酸化的磷酸化诱导嵌合小分子()技术,调控蛋白的活性。
SuperSep Phos-tag™ 是研究蛋白磷酸化的方法,无需特异性磷酸化抗体或者同位素标记。 ◆SuperSep Phos-tag™ Phos-tag™ 是一种预制胶,预先加入了50 μmol/L的Phostag™ Acrylamide,打开包装即可直接使用。预制胶中含有锌作为金属离子,在中心凝胶缓冲液中保存稳定性很好,得到的带条结果也很整齐。 磷酸化蛋...