1.利用pET32a-XBP1u质粒系统成功进行XBP1u的原核表达,并进行相关酶学检测和分析; 2.通过一系列的纯化步骤,获得高纯度的XBP1u蛋白; 3.制备高效、高特异性的XBP1u多克隆抗体,并进一步验证其特异性和识别能力。 三、研究内容及方法 1.构建pET32a-XBP1u质粒系统:对XBP1u编码区域的序列进行合成、克隆和验证,构建成pET...
我想问一下如果我在多克隆位点插入自己的CDS(去除TAG)的,经诱导表达后,通过his-tag纯化。 但是这样得到的蛋白质好像会比自己的蛋白质大了20多KDa。(his-tag+thriombin+s-tag+目的基因序列+his-tag) 如果我想去除这些多余的部分,该怎么办呢? 返回小木虫查看更多分享...
本研究首先运用多聚酶链式反应(PCR)、基因克隆等分子生物学技术构建了重组质粒pET32a-XBP1u,通过将其转化入大肠杆菌E.coli BL2l,得到大量包涵体表达的目的蛋白XBP1u,利用Ni2+-NTA树脂对目的蛋白进行纯化,之后进一步应用Western blot对纯化的目的蛋白进行分析,以鉴定得到的纯化XBP1u蛋白,用该纯化蛋白免疫家兔制备抗XBP1...
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融合蛋白的大小约为:(189-2+297/3)×110≈31460道尔顿
pET32a-XBP1u蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备的开题报告一、研究背景XBP1(X-boxbindingprotein1)是一种在细胞内负责调节内质网(ER)应激反应的转录因子,在内质网应激(ERstress)发生时能够通过非常规剪切的方式产生活性的转录因子形式(XBP1u),并进一步调节众多靶基因的表达,以保证机体能够有效地适应外界环境的变化...
我想问一下如果我在多克隆位点插入自己的CDS(去除TAG)的,经诱导表达后,通过his-tag纯化。但是这样...
融合蛋白的大小约为:(189-2+297/3)×110≈31460道尔顿
融合蛋白的大小约为:(189-2+297/3)×110≈31460道尔顿
融合蛋白的大小约为:(189-2+297/3)×110≈31460道尔顿