CTCF/pEGFP-Nl过表达载体及CTCF-shRNA真核表达载体并鉴定,为后续研究所用。方法:(1)将编码 CTCF全长的pGEM-7Zf(-)/CTCF质粒经EcoRT酶切后回收并纯化CTCFDNA片段,再亚克隆到经EcoRl 线性化的pEGFP-N1载体并转化到DH5a感受态宿主菌,挑取阳性克隆进行酶切鉴定。(2)根据人CTCF ...
[0249] (11)在吸附膜中加入50yLElution Buffer室温下静置1~2min,9000r/min离心 lmin,所得溶液即为重组质粒pEGEP-Nl-p53的DNA。 [0250] 2、重组质粒pEGEP-Nl_p53的酶切 [0251] 将所提取的重组质粒pEGEP-Nl_p53进行Xbal和Notl限制性内切酶消化鉴定。参照 大连宝生物公司内切酶使用说明书。 [0254]总体积20...
结果: (1)重组质粒 CTCF/pEGFP-N1 的酶切结果表明 CTCF 正向插入 EGFP-N1 载体里。(2)阳性克隆的酶切及测序结果表明 CTCF shRNA 已经正确插入质粒载体 pSIREN-Shuttle 里。结论:成功构建 CTCF/pEGFP-N1 过表达载体及靶向人 CTCF 基因的 shRNA 真核表达载体。关键词:CTCF 结合因子;载体构建;RNA 干扰中图...
pEGFP-N1质粒序列是一个大肠杆菌表达载体,Tac强启动子可以驱动GST促溶标签和目的基因融合表达,LacI阻碍蛋白和Laco操作子使本质粒在没有加入IPTG之前禁止表达,防止其影响细菌生长。表达后的融合蛋白可用凝血酶蛋白酶切割,再过一次GST柱子即可清除掉GST标签。 产品相册pEGFP-N1质粒序列CTTTCCTGCGTTATCCCCTGATTCTGTGGATAACC...
pEGFP-N1编码野生型GFP(1-3)的红移变体,该变体已经过优化,可以在哺乳动物细胞中获得更亮的荧光和更高的表达。(最大激发波长= 488nm;最大发射波长= 507nm。)pEGFP-N1编码GFPmut1变体(4),其包含Phe-64对Leu和Ser-65对Thr的双氨基酸取代。EGFP基因的编码序列包含超过190个沉默碱基的变化,这些变化对应于人类密码...
pEGFP-N1 哺乳动物表达载体-质粒载体-分子生物学 启动子: CMV 复制子: pUC ori,f1 ori 终止子: SV40 ploy(A) 载体别名:pEGFPN1,pEGFP N1 载体分类:哺乳细胞表达载体,荧光蛋白报告载体 载体大小:4733bp 载体标签:增强型荧光蛋白报告基因EGFP 原核抗性:卡那霉素(Kanamycin)...
pEGFP—N1-Snail真核表达质粒的构建与表达
电泳后回收切开的PEGFP—N1及caveolin1片段,经连接反应后构建PEGFP—N1/CAV1真核表达载体.结果:PEGFP- N1/CAV1重组质粒经PCR电泳结果显示,得到一条在555bp的片段; 重组质粒经限制性内酶切双酶切电泳结果证实,可释放一条在555bp的片段和4.8kbp的载体片段;重组质粒测序结果,经 BIAST比对,100符合;瞬时转染宫颈癌...
目的:构建CTCF/pEGFP-N1过表达载体及CTCF-shRNA真核表达载体并鉴定,为后续研究所用.方法:(1)将编码CTCF全长的pGEM-7Zf(-)/CTCF质粒经EcoRI酶切后回收并纯化CTCF DNA片段,再亚克隆到经EcoRI线性化的pEGFP-N1载体并转化到DH5α感受态宿主菌,挑取阳性克隆进行酶切鉴定.(2)根据人CTCF mRNA序列设计并体外合成CTCF...