1. 先调节阴性对照管,将原补偿清零。调节电压,使阴性群落在FITC和PE双阴性区。 2. 进行FITC单染管调节。在理想情况下,检测管中不应该出现PE信号。但在实际情况中,可能在FITC与PE的双阳性区出现荧光信号。这个信号是PE探测器检测到的FITC信号。此时,需要通过...
1. 如果发现自动补偿不满足自己的需求,可以手动进行补偿。双击文件前面的九宫格,可以得到该组的补偿数据,黄色部分代表现在的补偿数据,可以作为手动补偿的参考值。 2. 点击「Edit」,通过改变黄色位置的数字来进行补偿,该处数字没有具体值,需要一点点自己摸索。此时样本...
以FITC-PE为例。在散点图上，划分为四个象限。如果纵坐标是FITC， 横坐标是PE。调节电压后，阴性的细胞位于左下象限。这是可以得出阴性细胞横坐标（PE）和纵坐标（FITC）的平均荧光强度值。电压调好以后，上单色阳性样本。比如上牌FITC阳性，这时不要再改变电压了，而是调节补偿系数，最终目的就是让FIT...
l细胞l补偿微球细胞通常是流式抗体单染管对照的样本首选，但是当细胞数量有限，无多余细胞用于抗体单染或感兴趣的表面抗原表达较低，阳性分群不明显不足以用来调节补偿时，建议选择补偿微球。补偿调节时要注意：l使用未染色的细胞做PMT的电压设置l不要使用未染色的补偿微球设置电压eBioscience提供两种补偿微球...
流式荧光通道之间霑要调节补偿是因为流式荧光素在相应激光激发后发射的荧光波长并不是完全集中于一个很小的范。如下表所示:FITC荧光素,被488nm激光激发后发射的荧光信号80%集中于510-550nm,也就是第1荧光通道(FL1)范围之间,表示FITC所发射的荧光信号80%被FL1接收,而10%位...
3. 荧光染料重叠最小化:尽量选择光谱重叠小的荧光素,如FITC/PE-Cy7;选择不同激光激发的荧光素,如FITC/APC,PE/APC。 光谱重叠严重的荧光素同时检测会导致荧光溢漏,需调节补偿。 4. 避免复合染料联合使用带来的假阳性:常见的复合染料有PE-Cy5、PE-Cy5.5、PE-Cy7、PerCP-Cy5.5、APC-Cy7等,复合染料的信号衰...
以FITC和PE为例来看光谱重叠。FITC单染管的荧光会部分漏到PE通道中,而这部分需要从PE通道中减掉溢漏过来的FITC荧光。那么荧光补偿该如何调节呢?l调节电压l检测荧光通道的自发荧光l每个荧光通道做单染管对照检测何为单染管对照?l细胞l补偿微球细胞通常是流式抗体单染管对照的样本首选,但是当细胞数量有限,无多余细胞...
原理:流式荧光通道之间需要调节补偿主要是因为流式荧光素在相应激光激发后发射的荧光波长并不是完全集中于一个很小的范围。(并不是一个荧光信号只能被一个通道吸收,也可能被其他范围内的通道吸收) 示例:FITC荧光素,激发光长度为488nm,发射后的荧光信号集中在80%集中于510-550nm,处于FL1通道之中,表示FITC所发射的...
做补偿调节,需要以下的样本,无任何染色的样本,分别是FITC,PE,PerCP还有APC单染阳性的样本,所以你这里需要一共5个管子。在纯手工的年代,你需要画出这四个颜色两两配对的散点图,比如FITC-PE,FITC-PerCP,FITC-APC,PE-PerCP,PE-APC,PerCP-APC,这一共6个散点图。然后,先上未染色的样本,调节各个荧光通道的...
以FITC-PE为例。在散点图上,划分为四个象限。如果纵坐标是FITC, 横坐标是PE。调节电压后,阴性的细胞位于左下象限。这是可以得出阴性细胞横坐标(PE)和纵坐标(FITC)的平均荧光强度值。电压调好以后,上单色阳性样本。比如上牌FITC阳性,这时不要再改变电压了,而是调节补偿系数,最终目的就是让FITC阳性的细胞都位于...