作者使用DARTS+MS 实验预测了 221 个潜在靶蛋白(图3A),分析排名靠前的基因发现棕榈酰转移酶可能是直接靶点,接着排除了位于细胞核内的DHHC(与PDL1缺乏空间重叠)后,筛选到10个潜在靶点(图3B),逐一敲低这些基因后发现敲低 DHHC3后会减少 PD-L1 蛋白表达(图3C)。co-IP结果显示肿瘤细胞中 PD-L1 和 DHHC3 之间...
棕榈酰化可以显著抑制PD-L1的泛素化修饰,从而抑制PD-L1的降解。 肿瘤细胞中PD-L1的棕榈酰化主要由棕榈酰转移酶家族中的DHHC3调控,通过shRNA敲低小鼠MC38肿瘤细胞中DHHC3的表达,导致PD-L1的表达显著降低。小鼠体内实验进一步表明,敲低DHHC3会显著抑制MC38肿瘤细胞的生长。 前期的实验已经证实棕榈酰化的抑制剂2-BP能...
PD-L1抑制剂、BC、CTLA-4抑制剂单独治疗或联合治疗效果 最后,研究团队利用6名结直肠癌患者的数据以及TCGA数据库进行分析,结果与预期相符,肿瘤组织中的DHHC3和PD-L1表达水平高于癌旁组织,且DHHC3和PD-L1表达呈正相关。这些结果表明,在结直肠癌中,PD-L1的稳定性需要DHHC3介导的棕榈酰化修饰。 DHHC3和PD-L1表达呈...
C272处的棕榈酰化通过对抗泛素化而增加PD-L1的稳定性。DHHC3催化PD-L1的C272棕榈酰化。沉默DHHC3可增强体内外的抗肿瘤免疫反应。 Perspectives and conclusion 6翻展望和结论 越来越多的证据表明,仅仅通过PD-L1丰度来选择患者是不准确的。了解炎症诱导的PD-L1和致癌信号介导的PD-L1之间的差异有助于患者的选择。...
2-BP对棕榈酰化的阻断显著增加了PD-L1的单泛素化(通过特异性抗体检测;补充图5a),而DHHC3的缺失也引起了类似的效果(图5b,c)。 PD-L1与肝细胞生长因子调节的酪氨酸激酶底物(HRS)之间的相互作用在PD-L1棕榈酰化的阻断下显著增加(HRS蛋白是ESCRT-0复合物的一个亚基,HRS通过其泛素结合域将单泛素化的货物蛋白锚定...
通过分析全部DHHC成员在肿瘤中的表达并对多个DHHC进行敲低和验证,作者发现了在肿瘤细胞中对PD-L1棕榈酰化发挥主要调控作用的DHHC3棕榈酰转移酶。在多种肿瘤细胞中,DHHC3和PD-L1存在显著的结合与共定位,且组织芯片染色表明DHHC3的表达和PD-L1呈...
我们的研究结果进一步证明,突变CRAC基序破坏了PD-L1与胆固醇的相互作用,降低了PD-L1的细胞水平(39)或溶酶体降解(25)棕榈酰转移酶DHHC3的棕榈酰化(40)但目前还不清楚胆固醇对哪种途径有影响。我们的数据显示PD-L1突变体增加了泛素化水平;胆固醇有可能稳定膜中的PD-L1,抑制下游泛素依赖性降解。然而,我们不能排除胆固...
通过分析全部DHHC成员在肿瘤中的表达并对多个DHHC进行敲低和验证,作者发现了在肿瘤细胞中对PD-L1棕榈酰化发挥主要调控作用的DHHC3棕榈酰转移酶。在多种肿瘤细胞中,DHHC3和PD-L1存在显著的结合与共定位,且组织芯片染色表明DHHC3的表达和PD-L1呈正相关。在小鼠的MC38肿瘤细胞中,干扰DHHC3的表达也造成了PD-L1蛋白质...
DHHC酶的特异性由底物序列决定,所以PD-L1的被修饰位点附近的多肽序列可能竞争抑制DHHC3对内源性PD-L1的修饰。理论上这种竞争性抑制剂对DHHC成员的选择性较比-BP更强。作者通过一系列实验证明上述竞争抑制剂的设计思路是有效的,并通过设计的PD-PALM多肽降低了肿瘤细胞PD-L1的表达量。在此基础上,今后还可以对PD-...
作者发现PD-1棕榈酰化修饰酶主要为DHHC9(不同于PD-L1的DHHC3),其修饰的基序为“VICSRAAR“,这种多肽与穿膜肽进行整合后,可导入细胞并竞争结合DHHC9,抑制内源的PD-1棕榈酰化,从而诱导PD-1的溶酶体降解。 这种新的PD-1抑制剂不同于以往的抗体或用于阻断PD-1/PD-L1结合的小分子或多肽,具有较强的新颖性,...