载体构建与转染构建人PD-L1真核载体的核心步骤为将PD-L1基因序列克隆入pIRES2-EGFP载体中，该载体包含GFP荧光标记基因，便于后期筛选。载体构建后，使用威尼德电穿孔仪进行电转染，优化电转染参数以提高转染效率。转染后，细胞在筛选压力下培养，以保证稳定转染细胞的扩增。稳定转染细胞的筛选与扩增转染后的细胞在加入适...
PD-L1表达分析通过Western blotting结果可以确认,稳定转染PD-L1的细胞在蛋白水平上显著高于对照组,且免疫荧光染色显示PD-L1在细胞膜表面有明显的表达。流式细胞术检测结果进一步验证了转染细胞表面PD-L1的高表达,且相较于非转染细胞,PD-L1的荧光强度提高了三倍以上,表明构建的PD-L1稳定转染细胞系在蛋白表达上是成功...
虽然白细胞介素(IL)-2诱导性T细胞激酶(ITK)-脾相关酪氨酸激酶(SYK)(与eGFP)在其他未受干扰的原代T细胞中急性表达可以引发淋巴细胞增殖数天,但它无法诱发明显的恶性肿瘤,这需要获得额外的遗传命中。然而,肿瘤抑制基因Pdcd1的丢失足以使淋巴瘤T细胞在...
随后表征发现,Pep LNP具有球形形状,EGFP mRNA的包封率为96.4%。在稳定性评估中,发现在 4°C 下保存14天后,EGFP/Pep LNP对CT26.CL25细胞转染效率开始略有下降,直到第35天显著下降,PDI值保持在0.1以下,说明粒径分布稳定(图2j-I),...
构建人PD-L1真核载体的核心步骤为将PD-L1基因序列克隆入pIRES2-EGFP载体中,该载体包含GFP荧光标记基因,便于后期筛选。载体构建后,使用威尼德电穿孔仪进行电转染,优化电转染参数以提高转染效率。转染后,细胞在筛选压力下培养,以保证稳定转染细胞的扩增。 稳定转染细胞的筛选与扩增 ...
构建治疗策略:开发一种纳米载体,利用重组腺病毒作为溶瘤病毒(OVs),以血清型 5 腺病毒为骨干,删除 E1B - 55kD 基因,并插入 EGFP 或 DsRed 基因,用阿仑膦酸钠和抗 PD - 1 包被,形成 PD - 1/Al@OV,旨在消耗 TAMs,增强免疫检查点阻断(Immune checkpoint blockade,ICB)治疗的反应性和效率。
1、细胞-外泌体孵化WB结果显示Exo-PD-1对应的PD-1表达量更多,表明Exo-PD-1比Exo-con更能被PD-L1过表达的肿瘤细胞吸收。说明PD-1与PD-L1结合可介导外泌体运输。2、探究外泌体摄取途径:WB和共聚焦成像结果表明,相较于CDE(小窝蛋白介导内吞作用)抑制剂,Exo-PD-1-EGFP进入细胞能够被CME(网格蛋白介导内吞...
图1h示出pd-l1mk细胞经历成熟和分化的不同阶段(比例尺:10μm)。i:成熟egfp-pd-l1mk细胞;ii:前血小板从mk细胞的出芽;iii:前血小板从mk细胞的延伸;iv:前血小板从mk细胞的释放。图1i示出从l8057细胞延伸的pd-l1前血小板的形态(比例尺:10μm)。图1j示出纯化的pd-l1血小板的共聚焦图像(比例尺:2μm)。图...
[图1]大鼠抗牛pd-l1抗体6c11-3a11的结合特异性。虽然大鼠抗牛pd-l1抗体6c11-3a11未与egfp表达细胞结合,但与犬pd-l1-egfp表达细胞发生了特异性结合。 [图2]大鼠抗牛pd-l1抗体6c11-3a11的预测的cdr区域。示出了大鼠抗牛pd-l1抗体6c11-3a11的轻链可变区及重链可变区中的cdr1、cdr2及cdr3区域。
本发明提供一种PDL1靶向的重组溶瘤腺病毒及其应用.该病毒(ZD55FHIsPD1EGFP)以5型腺病毒为骨架,包含以CMV启动子启动表达的外源基因EGFP,以及在腺病毒纤毛蛋白的HIloop中间插入了人PD1与PDL1结合的8个保守氨基酸序列sPD1(7077aa).在免疫完全雌性BALB/c小鼠荷瘤4T1模型中,治疗组显出比对照溶瘤腺病毒ZD55EGFP治疗...