荧光PCR探针检测即在PCR扩增时，加入一对引物的同时再加入一个特异性荧光探针（寡核苷酸）。根据检测中所使用的荧光探针分类，目前已经开发出TaqMan探针、分子信标（Molecular Beacon，MB）、蝎形探针（Scorpion Probes）、链置换探针、Eclipse探针、Scorpion探针、单标探针（Single-labeled Probe）以及双杂交探针（Dual Hybr...
这两个引物将在PCR反应中作为DNA合成的起始点。 2.设计荧光探针:接下来设计荧光标记的探针,通常是由一段与目标序列互补的DNA序列和一种荧光染料以及一个与染料不相互作用的猝灭剂组成。当探针与目标序列结合时,猝灭剂与荧光染料相互作用,使荧光信号无法被探测到。 3. PCR反应:将样本DNA与引物和荧光探针一起加入...
PCR扩增遵循的基本原则是DNA的半保留复制和碱基互补配对原则;在PCR扩增过程中,通过荧光信号,对PCR进程进行实时检测。特点是:1.灵敏度高,特异性好,重复性好。2 .监测整个PCR扩增的过程。3.扩增及检测均在PCR仪上自动完成,自动化程度高,简便快捷,结果客观。4.避...
PCR(Polymerase Chain Reaction)是一种重要的分子生物学技术,它能够在体外迅速扩增DNA片段。PCR荧光探针法是PCR技术的一种重要应用,它通过引入荧光探针来实现对PCR产物的实时检测,具有高灵敏度、高特异性和高准确性的优点。本文将介绍PCR荧光探针法的原理及其应用。 PCR荧光探针法利用一种叫做荧光探针的分子来实现对PCR...
PCR的基本原理是通过不断地重复DNA的变性、退火和延伸三个步骤,从而实现DNA的扩增。 在PCR荧光探针法中,荧光探针是一种含有荧光物质的DNA探针,它由三部分组成,引物结合区、荧光素结合区和猝灭结合区。当荧光探针与目标DNA序列结合时,荧光素结合区和猝灭结合区之间的距离会发生改变,从而导致荧光信号的释放或猝灭。
在PCR 反应过程中,随着循环次数的增加,PCR 产物的积累导致荧光信号的增强。因此,通过监测荧光强度,在"实时"中检测到 PCR 反应的进展。科学研究中较为常用的是 SYBR Green qPCR 和T aqMan 探针 qPCR。 荧光PCR是一种用于生物学领域的分析仪器,于2003年1月3日启用。
Scorpion探针是一种结构特殊的PCR荧光探针。它由特异性引物序列、荧光素(如FAM)和荧光淬灭剂(如BHQ1)组成。Scorpion探针在非结合状态下形成一个环状结构,荧光淬灭剂与荧光素之间的作用导致荧光信号熄灭。当目标序列存在时,引物与目标序列结合,使Scorpion探针发生结构改变,从而使荧光淬灭剂与荧光素分离,荧光信号得以释放。
荧光定量PCR技术(Real-time Quantitative PCR,qPCR)是指在PCR反应体系中加入荧光化学物质,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最终通过相对定量或绝对定量的方法来实现对初始模板的定量分析。 根据所加入的荧光化学物质不同可分为:荧光染料法和荧光探针法。
当前核酸分子的定量有三种方法,光度法基于核酸分子的吸光度来定量;实时荧光定量PCR是指在PCR体系中加入荧光染料或荧光探针,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过CT值和标准曲线对未知DNA模板进行定量分析的方法,其中,Ct值就是指可以检测到...