PCR-RFLP是将聚合酶链反应与RFLP方法结合的一种检测技术。由于DNA序列的差异,造成了内切酶位点的变化,或是新的酶切位点的产生;或是原酶切位点的消失等,通过酶切后电泳图谱的判断,达到确定检测结果。该方法包括1PCR。即利用一对或数对特异性引物,将目标DNA扩增;2酶切。即利用某些限制性内切酶消化PCR产物,如PCR产...
CAPs(cleaved amplification polymorphism sequence-tagged sites) CAPs技术又称为PCR-RFLP,限制性片段长度多态性聚合酶链反应(PCR-RFLP)技术。是用特异设计的PCR引物扩增目标材料时,由于特定位点的碱基突变、插入或缺失数很少,以至无多态出现,往往需要对相应PCR扩增片段进行酶切处理,以检测其多态性。CAPs标记在二倍体植...
聚合酶链式反应—限制性片段长度多态(PCR—RFLP)分析技术是在PCR技术基础上发展起来的。DNA碱基置换正好发生在某种限制性内切酶识别位点上,使酶切位点增加或者消失,利用这一酶切性质的改变,PCR特异扩增包含碱基置换的这段DNA,经某一限制酶切割,再利用琼脂糖凝胶电泳分离酶切产物,与正常比较来确定是否变异。应用PCR—RF...
限制性内切酶MstⅡ切割的序列是CCTGAGG(其中N是任何一种核苷酸),切割正常DNA产生1.15+0.20 kb β珠蛋白的DNA片段;若切割患者DNA时,由于A→T破坏了MstⅡ的位点(CCTGTGG),便形成1.35kb β珠蛋白的DNA片段(图5-3)。利用以上原理,利用PCR-RFLP的技术进行诊断。 图5-3 PCR-RFLP诊断镰状细胞贫血原理图反馈 收藏 ...
PCR-RFLP（聚合酶链反应-限制性片段长度多态性）技术的核心在于它的操作流程。首先，通过PCR步骤，目标DNA被高效扩增，其目的在于增加待检测DNA片段的浓度，以确保后续步骤的准确性。PCR产物随后接受特异性内切酶的处理，这种酶能够识别并切割DNA分子在特定的限制性酶切位点，导致DNA片段被切成不同长度的片段...
技术基本原理和实例 采用的巢式PCR-RFLP分型技术,其基本原来是利用PCR引物的3’端,对SNP位点附近的碱基进行人为改造,产生一个常规的限制性内切酶识别序列,如SNP rs1321425(rs1321425-来自NCBI的refSNP数据库)的C/G,其任何一个碱基和上下游碱基无法形成一个可直接被限制性内切酶识别的序列,于是我们对SNP位点前的上游...
原理 •PCR-RFLP是酶切扩增多态性序列标记技术,又称为CAPS,主要是对PCR扩增的DNA片段进行限制性酶切分析。它是根据EST或已发表的基因序列等设计特异引物,将特异PCR与限制性酶切相结合而检测多态性的一种技术。•基本原理是利用己知位点的DNA序列资源设计出一套特异性的PCR引物(19~27bp),然后用这些引物扩增该...
原理 •PCR-RFLP是酶切扩增多态性序列标记技术,又称为CAPS,主要是对PCR扩增的DNA片段进行限制性酶切分析。它是根据EST或已发表的基因序列等设计特异引物,将特异PCR与限制性酶切相结合而检测多态性的一种技术。•基本原理是利用己知位点的DNA序列资源设计出一套特异性的PCR引物(19~27bp),然后用这些引物扩增该...
【实验原理】PCR-RFLP【实验原理】聚合酶链式反应(PCR)是模拟体内DNA复制条件在体外酶促合成特异DNA片段的循环反应,可使目的DNA片段得以迅速扩增。其主要步骤是:将待扩增的模板DNA置于高温(约93℃-95℃)下使之变性解链;人工合成的两个寡核苷酸引物在低温(约50℃-70℃)下分别与目的DNA掀遥腊瑶干卒炸斋你让贝胡...