5、镁离子(Mg2+) 6、缓冲液 推荐内容 一、PCR基础背景知识 聚合酶链式反应,又称为PCR,是众所周知的分子生物学技术之一。 PCR是一种能够在短时间内将单个DNA分子扩增数百万倍的生化过程。 其扩增过程包括三个连续步骤: (1) 变性,对双链DNA模板进行加热,使其解离; (2) 退火,被称为引物的短DNA分子与目标DNA...
(1)干扰核酸提取过程中的细胞裂解:抑制物质会致细胞裂解不完全,核酸不能有效释放,影响PCR的扩增。 (2)热稳定的DNA聚合酶的失活:环境样本中常见的抑制物腐殖化合物,可通过对Mg2+的鳌合作用从而抑制聚合酶活性。 (3)抑制物对核酸的降解和包裹:细胞中存在的核酸酶、细菌...
而在PCR反应中,镁离子(Mg2+)的存在对于反应的进行起到了至关重要的作用。 镁离子对于DNA的稳定性和特异性起到了重要的调节作用。在PCR反应中,DNA的双链结构需要被解开,以便引物与模板DNA进行特异性的结合。而镁离子可以促使DNA的解旋,使得引物能够与模板DNA的特定区域配对。此外,镁离子还可以通过与DNA双链结合,...
铵离子(NH4+) 具有去稳定作用,尤其对于错配引物-模板复合物碱基对之间的弱氢键,因此可增强反应特异性 Mg2+ 浓度过低会降低聚合酶活性,导致PCR产物较少或无PCR产物。另一方面, Mg2+ 浓度过高则会提高引物-模板复合物的稳定性,产生非特异性PCR产物,并增加由dNTP错误插入导致的复制错误。 由于NH4+ 与Mg2+具有拮抗效...
(2)镁离子浓度:一般用量1.5~2.0mmolL,TaqDNA聚合酶活性需要Mg2+。Mg2+浓度过低,会显著降低酶活性。Mg2+浓度过高又使催化非特异性扩增增强。Mg2+浓度还会影响底物的退火、模板与PCR产物的解链温度,从而影响小型化片段的产率。 (3)底物浓度:工作浓度20~200μmolL,dNTPs的质量与浓度和PCR扩增效率有密切关系。浓度...
PCR技术是一种重要的分子生物学技术，可以在体外迅速扩增特定的DNA片段。PCR反应的成功与否，主要取决于五个要素：引物、酶、dNTP、模板DNA和Mg2+ 引物设计：1. 根据目标序列设计引物，引物的长度应为15-30bp，常用长度为约20bp。2. 引物的GC含量应在40-60%之间，避免过低或过高的GC含量。3. 引物的碱基组成应...
PCR反应中的主要由引物、 4种三磷酸脱氧核苷酸(dNTP)、Mg2+、模板和Taq DNA聚合酶五个成份组成。各个组份都能影响 PCR 结果的好坏。 01 引物 PCR反应产物的特异性由一对上下游引物所决定。引物的好坏往往是PCR成败的关键。引物设计和选择目的DNA序列区域时可遵循下列原则:...
百度试题 结果1 题目PCR反应体系中,Mg2+离子的作用是什么? A. 稳定DNA聚合酶 B. 作为DNA聚合酶的底物 C. 作为DNA聚合酶的辅酶 D. 促进DNA模板的解旋 相关知识点: 试题来源: 解析 A 反馈 收藏
和其他许多聚合酶一样,Taq DNA聚合酶是Mg2+依赖性酶,该酶的催化活性对Mg2+浓度非常敏感。以鲑鱼精子DNA为模板,dNTP的浓度为0.7～0.8 mmol/L时,用不同浓度Mg2+进行PCR反应10min,测定结果为MgCl2浓度在2.0 mmol/L时该酶催化活性zui高,此浓度能zui大限度地激活Taq DNA聚合酶的活性,Mg2+过高就抑制酶活性,当MgCl2...
百度试题 结果1 题目在PCR反应中,Mg2+离子的作用是什么? A. 作为DNA聚合酶的辅助因子 B. 提供DNA聚合酶的结合位点 C. 促进DNA链的延伸 D. 稳定DNA双链结构 相关知识点: 试题来源: 解析 A 反馈 收藏