1.递减PCR(touchdown PCR):前几循环温度逐渐下降。 2.逆转录PCR(RT-PCR):以由mRNA逆转录而来的cDNA为模板,也因为是从表现型基因来进行增量的,由此产生出来的cDNA产物不带有内含子(基因中不具意义的段落),常应用于分子克隆技术。 3.热启动PCR(hotstart PCR...
经验证,使用MGDP芯片进行染色体不平衡检测与FISH的诊断符合率可达100%[8],表达谱芯片(gene expression profiling array,GEP array):1999年,Duggan等[9]首次使用cDNA芯片绘制了mRNA表达谱信息。随着表观遗传学在疾病发生发展中的作用日益得到重视,目前也...
经验证,使用MGDP芯片进行染色体不平衡检测与FISH的诊断符合率可达100%[8],表达谱芯片(gene expression profiling array,GEP array):1999年,Duggan等[9]首次使用cDNA芯片绘制了mRNA表达谱信息。随着表观遗传学在疾病发生发展中的作用日益得到重视,目前也已出现microRNA芯片、长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)...
上世纪60年代至80年代是分子杂交技术发展最为迅猛的20年,由于当时尚无法对样本中靶基因进行人为扩增,人们只能通过已知基因序列的探针对靶序列进行捕获检测。其中液相和固相杂交基础理论、探针固定包被技术与cDNA探针人工合成的出现,为基于分子杂交的体外诊断方法进行了最初的技术储备。 (一)DNA印迹技术(Southern blot) So...
2.逆转录PCR(RT-PCR):以由mRNA逆转录而来的cDNA为模板,也因为是从表现型基因来进行增量的,由此产生出来的cDNA产物不带有内含子(基因中不具意义的段落),常应用于分子克隆技术。 3.热启动PCR(hotstart PCR):以高热激活型核酸聚合酶进行反应,减少非专一性产物。
上世纪60年代至80年代是分子杂交技术发展最为迅猛的20年,由于当时尚无法对样本中靶基因进行人为扩增,人们只能通过已知基因序列的探针对靶序列进行捕获检测。其中液相和固相杂交基础理论、探针固定包被技术与cDNA探针人工合成的出现,为基于分子杂交的体外诊断方法进行了最初的技术储备。
PCR和DNA测序技术 PolymeraseChainReaction (PCR，多聚酶链式反应)特异片断的体外扩增技术 无细胞克隆技术(“freebacteria”cloning technique）常用PCR仪 发展历程 1983年，由Cetus公司的KaryMullis建立 1985年，Saiki等在《science》上详细描述（人珠蛋白DNA）1988年耐热的TaqDNA聚合酶被发现和应用，把PCR推向了实用阶段...
检测过表达株系,可以先提取目标株系的总RNA,然后将RNA逆转录成cDNA,通过qRT-PCR实验检测靶标的相对表达量。当然,一个内参基因和一个对照样本也是实验中必要的。再利用∆∆Ct法即2-([Ct(样品基因)-Ct(样品内参基因)]–[Ct(对照目的基因)-Ct(对照内参基因)])计算过表达株系目的基因的转录水平变化。有的实...
但FISH 不能达到 100%杂交,特别是在应用较短的 cDNA 探针时效率明显下降。 虽然NGS 作为新兴测序技术近些年来发展势头迅猛,但目前市场上的伴随诊断测序服务和产品仍以 PCR 技术为主,且与 PCR 和 NGS 相比,FISH 技术总体来说应用较少。 PCR、NGS、FISH 技术优缺点对比 ...
第三章 核酸的体外扩增与测序 2013-12-29 1 第一节聚合酶链反应 （Polymerasechainreaction,PCR）一、PCR技术简史(P402)PCR的实现 1985年美国PE-Cetus公司人类遗传研究室的 Mullis等发明了具有划时代意义的聚合酶链反应。其原理类似于DNA的体内复制，只是在试管中给DNA的体外合成提供一种合适的条件：模板DNA、寡...