PCR-ASO,是用寡核苷酸探针与PCR产物杂交以检测点突变的技术。 PCR-SSCP:是根据单链DNA分子能自发地形成二级结构,且二级结构的空间构象 取决于DNA分子本身的碱基组成。 变性梯度凝胶:是根据DNA双链分子局部变性为单链后导致电泳迁移率下降的特 性,用梯度反馈...
(2)杂交类型,PCR技术的出现,从根本上解决了靶DNA的来源问题,使人们能在 很短的时间内获足够量的靶DNA,传统的PCR-ASO技术主要是将PCR,占物固定于杂交 膜上,然用不同的标记探针检测,亦有将已标记好的探针预先固定于杂交膜上,再使 之与PCR产物结合,检测有无完全互补的DNA产物. (3)探针的标记,最先应用的标记...
基于原理的差异,下面简要介绍几种SNP的检测分析技术 1.阵列杂交分析( array hybridization assays) 基于寡核苷酸与不同靶序列变异配对时的杂交稳定性差异原理,主要有两种形式:第一种是ASO( allele specific oligonucleotide hybridization,等位基因特异性寡核苷酸杂交)探针与DNA样品的多重PCR产物阵列杂交,适用于扫描多个病例...
(二)ASO反向斑点杂交(allele-specific oligonucleotide reverse dot blot,ASO-RDB) 使用核酸印迹技术进行核酸序列的杂交检测具有极高的特异性,但存在操作极为繁琐,检测时间长的缺点。1980年建立的样本斑点点样固定技术则摆脱了传统DNA印迹需要通过凝胶分离...
c、扩增的靶DNA片段与标记的等位基因特异性寡聚核苷酸探针(ASO)进行杂交。在严格杂交条件下,根据与何种ASO探针杂交,可判断有无突变及突变的类型(PCR-ASO)。 d、扩增的片段直接进行DNA顺序分析,可直接测出突变点。 e、PCR产物单链构像多态性分析(PCR-SSCP),这一方法是根据同一顺序位置的不同碱基替换,以及同一碱基...
聚合酶链式反应 PCR 基因突变的类型（一）基因缺失：α地贫、DMD或BMD、变形性骨炎、无精症 诊断方法：Southernblot，PCR 1 基因突变的类型（二）点突变：HbMckees-Rock、HbConstantSpring、β地中海贫血等。诊断方法：RFLP、ASO杂交、PCR产物多态性分析（RFLP、SSCP、DGGE）2 基因突变的类型（三）印记基因异常：贝...
17、分子水平分析 已知突变的检测和未知突变的筛选方法较多,有:ASO法、AS-PCR法、单链构象多态性PCR、 引物竞争PCR法等。单链构象多态性(single-strand conformation polymorphisms, SSCP)是根据大小极相近的单链核酸分子在非变性条件下,电泳迁移率与其序列有关,八、逆转录PCR(RT-PCR) 逆转录PCR(RT-PCR)又称RNA...